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分析有机磷农药的实验方法-® LC-MS/MS液质分析系统

发布时间:2019-12-22   点击次数:1198次

API 3200™ 3200 QTRAP® LC-MS/MS液质分析系统色谱分离流动相的制备:

1M甲酸铵溶液:称取 63g甲酸铵,溶于1L HPLC级的水中。

流动相A:在1L(HPLC) 中加入5mL 1M 甲酸铵溶液。

流动相B:在1L甲醇 (HPLC) 中加入5mL 1M 甲酸铵溶液。

 

样品制备(水果与蔬菜基质)

基于Anastassiadies等人提出的方法[1]

1. 称量10g切碎的样品;

2. 加入100µL 内标溶液(D5-莠去津 1µg/mL)

3. 加入10mL乙腈,剧烈振摇;

4. 加入4g无水MgSO41gNaCl

5. 马上涡旋混合,以防止MgSO4共聚物的生成;

6. 振摇30s后,4300r/min离心5min

7. 取出1mL初提液,转移至含有150mg无水MgSO4的离心管中;

8. 混合,5200r/min 离心1min

9. 取出500µL上清液,用水将稀释到1mL,得到提取液浓度约为0.5g/mL

 

基于Klein and Alder等人提出的方法[2, 3]

1. 5g10g样品中,加入水到10mL

2. 20mL甲醇,使用UltraTurrax 组织匀浆机匀浆2min

3. 有时需要过滤或离心;

4. 加入NaCl 溶液 (100mL水中含20 g NaCl ),每6mL加入NaCl溶液2mL

5. 5mL样品溶液浸泡ChemElut 柱;

6. 5min后,用16mL二氯甲烷洗脱;

7. 40℃挥发至干;

8. 用甲醇与水的混合溶液1.25mL (甲醇0.25mL,水1mL) 重新溶解;

9. 0.45µm滤膜过滤。

 

 

基于Lehotay et al.[4]提出的方法:

1. 使用Molinex 混合器或类似设备匀质水果或蔬菜样品;

2. 加入乙腈,(15.0± 0.05)g匀质的样品加乙腈15mL,超声提取2min后,混旋5min

3. 加入6g无水MgSO41.5g NaCl的混合物,剧烈振摇1min

4. 3000 r/min 离心5 min

5. 5mL上层溶液,加入1.8g无水MgSO4 0.3g Bondesil C8吸附剂;

6. 振摇20s

7. 使用Eppendorf 5301型浓缩仪,或类似设备挥发至干;

8. 用乙腈/水=1/9的溶液1mL重新溶解样品;

9. 12000r/min高速离心 2min

10. 上清液转入自动进样器的进样瓶中备用。

 

样品制备(蜂蜜、果汁、果酒)[5]

1. 预处理:

蜂蜜样品,对无结晶的实验室样品将其搅拌均匀对有结晶的样品,在密闭情况下,置于不超过60 的水浴中温热,振荡,待样品全部融化后搅匀,迅速冷却至室温分出0.5 kg作为试样,置于样品瓶中,密封,并标明标记。果汁、果酒样品,将取得的全部原始样品倒入洁净的搪瓷混样桶内,充分搅拌棍匀,再将混匀样品分装出两份(每份500mL),密封,作为试样,标明标记。

2. 提取:

称取15 g试样(精确至0.01 g)250mL具塞三角瓶中,加入30mL水,于40℃振荡水浴上,振荡溶解15min。加入10mL丙酮,然后将瓶中内容物移入50mL分液漏斗中。用40mL二氯甲烷分数次洗涤三角瓶,并将洗液倒入分液漏斗中,小心排气,用力振摇8次,静置分层,将下层有机相通过装有无水硫酸钠的筒形漏斗,收集于200mL鸡心瓶中。再先后加入5mL丙酮和40mL二氯甲烷于分液漏斗中,振摇1min,静置、分层后收集。如此重复提取两次,合并提取液,将提取液于40℃水浴旋转蒸发至约1mL,待净化。

3. 净化:

Envi-Carb柱中加入约2 cm高无水硫酸钠,将该柱连接在氨基Sep-Pak柱顶部,并将串联柱放入下接鸡心瓶的固定架上。加样前先用4mL乙睛+甲苯(3+1)预洗柱,当液面到达硫酸钠的顶部时,迅速将样品提取液转移至净化柱上,再用2mL乙睛+甲苯(3+1)洗涤样液瓶三次,并将洗液移入柱中。在串联柱上加上50mL贮液器,用25mL乙睛 +甲苯(3+1)洗脱农药,合并于鸡心瓶中,并在40℃水浴中旋转浓缩至0.5mL。对氨基甲酸醋类农药检测,加入5mL甲醇进行溶剂交换两次,后定容1mL,混匀,用于液相色谱—串联质谱测定。对于其他农药检测,加入25mL正己烷进行溶剂交换两次,后使样液体积约为1mL,加入40µL内标溶液,混匀,用于测定

 

色谱分离条件:

Agilent 1100 系统:G1312A二元泵系统、G1367A型自动进样器、柱温箱。

色谱柱:Phenomenex Synergi Fusion-RP反相柱,50 mm×2 mm,粒径 4µm

流动相:A相—H2O+5mM 甲酸铵;B相—甲醇+5mM 甲酸铵

 

MS/MS 检测:

API 3200™ 3200 QTRAP® LC-MS/MS液质分析系统TurboIonSpray®离子源,负离子模式,MRM 描方式

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