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使用安捷伦净化产品对毛发中的羧基-THC进行 LC/MS/MS测定

发布时间:2020-03-27   点击次数:847次

本应用简报比较了两种 LC/MS/MS 型号,即 Agilent 6470A三重四极杆液质联用系统和 Agilent 6495C 三重四极杆液质联用系统。本研究总结了可用于复杂毛发基质的 样品前处理技术。同时还介绍了使用 Agilent Captiva EMR-Lipid 执行净化步骤时选择 用于验证的终方法,以达到毛发中羧基-THC 0.2 ng/g 的临界浓度。

 

通过毛发测试滥用药物已有 50 多年的历 史。与生物体液相比,毛发测试的一个优 势在于它可提供更大的药物检测窗口期。 许多药物在毛发中保存完好。一个示例是 在一具距今 900 年的木乃伊的毛发中检 出了可ka因。毛发测试的应用包括刑事调 查,核实吸毒史,鉴定药物辅助性侵犯, 在儿童监护权案件中证明DU品的使用,假 释犯、药物治疗参与者或员工的戒断监 测,记录宫内暴露情况,以及确定某人是 否经常吸食大麻从而确定能否重新申领驾 照。图 1 显示了大麻素进入人体毛发的 可能途径。

由于毛发易于收集、很难掺假且具有较长 的检测期限,因此工作场所检测计划包 括毛发检测。许多国家/地区均发布了工 作场所毛发检测指南。指南确定大麻代谢 物/mg 毛发的初始测试临界浓度为 1 pg。 在巴西,该限值由毛发分析协会 (SoHT) 规定,每毫克毛发中 11-nor-9-羧 基-∆9 -四氢大ma酚 (THC-COOH) 的确认性 临界浓度为 0.0002 ng[2]。使用足够灵敏 的特定分析流程对毛发中的药物进行检测 和定量非常重要,这同时也是工作流程中 的瓶颈。这对毛发中的低浓度大麻素尤其 重要。免疫分析测试已得到广泛应用,但 在灵敏度、选择性和成本方面仍然存在 挑战。

 

色谱测定具有更高的特异性,可选择作为 毛发中大麻素的确定方法,提供良好的检 测限 (LOD) 和定量限。灵敏的免疫分析和 气相色谱测定具有更高的特异性,是确 定毛发中大麻素的不错选择,可提供较 低的 LOD 和定量限 (LOQ)。使用灵敏的 免疫分析、电子电离 (EI) 气相色谱/质谱 (GC/MS)、负化学电离 (CI) GC/MS, 以及气相色谱/串联质谱 (GC/MS/MS) 检 测毛发中大麻素的方法已有报道,其限值 仅为 SoHT 要求的 1/100–1/20,但需要 进行衍生化步骤[3–10]。

使用 LC/MS/MS 方法大的优势在于无 需衍生化,且该方法可用于筛查和确认 性测试。然而,与 GC/MS/MS 法相比, LC/MS/MS 法在大麻代谢物的检测和定 量方面存在不足,GC/MS/MS 在达到 检测限时可提供丰度高的信号。这一 局限性终会因毛发基质的复杂性而在 LC/MS/MS 技术中产生,并观察到离子 抑制。仅在临界浓度或更低浓度下的代谢 物才会产生明显的上述效应。表 1 列出 了目标分析物的特征。

实验部分:

材料和试剂 使用的材料如下: • Agilent Captiva EMR-Lipid 过滤柱, 3 mL,300 mg(部件号 5190-1003), 用于处理 40 mg 毛发,以及 1 mL, 40 mg(部件号 5190-1002)或 96 孔板(部件号 5190-1000), 用于处理 25 mg 毛发 • Vac Elut 20 真空萃取装置, 带 16 × 100 mm 试管收集架 (部件号 12234103) • Agilent InfinityLab Poroshell 120 Phenyl-Hexyl, 3.0 × 150 mm, 1.9 µm (部件号 693675-312), Poroshell 120 Phenyl-Hexyl, 3 × 5 mm, 1.9 µm, UHPLC 保护柱 (部件号 823750-943) • Agilent 1290 Infinity II 在线过滤器, 0.3 µm(部件号 5067-6189) 使用的化学品如下: • 羧基-THC 和 羧基-THC-d3 标准品分 别购自 Cerilliant 和 LGC • GC 级正己烷和乙酸乙酯 (EtOAc),以 及 LC/MS 级甲醇 (MeOH) 均购自 J.T. Baker • ACS 级氢氧化钠 (NaOH) 和乙酸购自 Merck/Sigma • 超纯水购自 Milli-Q

 

标样和溶液:

• 氢氧化钠 1 mol/L(毛发消解溶 液):称取 NaOH (4 g) 置于烧杯中。 用 50 mL 水溶解后,将溶液转移至 100 mL 容量瓶中。用少量水洗涤 烧杯 2–3 次。将溶液超声处理 1 分 钟,然后用水标定至容量瓶刻度。将 溶液保存在带塑料盖的瓶中 注意:当水加入氢氧化钠时会释放热量。 • 正己烷和 EtOAc (9:1 v/v)(毛发萃取 溶剂):将 90 mL 己烷和 10 mL 乙酸 乙酯混合均匀 • MeOH/水 (80:20 v/v)(Captiva EMR-Lipid 溶剂):将 80 mL 甲醇和 20 mL 超纯水混合均匀 • 内标 (IS) ― 羧基-THC-d3:用 MeOH 配制含 8 ng/mL 羧基-THC-d3 的 IS 溶液,相当于基质中 8 ng/g • 校准曲线标样 ― 羧基-THC (CCS): 用 MeOH 配制浓度分别为 0.15、 0.2、0.4、0.8、1.6 和 3.2 ng/mL 的 六个校准标样 • 质量控制 (QC) 溶液(羧基-THC):用 0.2 ng/mL 的溶液对批次进行质量控 制。在开始分析之前,将 0.04 ng/mL 的溶液进样至 LC/MS/MS 中评估系 统适用性

 

样品前处理方法:依次用水、丙酮和二氯甲烷 (DCM) 对毛 发样品进行 1 分钟的涡旋清洗。干燥毛发 并将其剪成小块。随后,样品前处理方法 包括四个阶段:1) 毛发消解和预净化, 2) 液液萃取 (LLE),3) Captiva EMR-Lipid 净化,以及 4) LC/MS/MS 进样。

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