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采用 LC/QQQ 法测定鸡肉中的甲硝唑

发布时间:2020-11-18   点击次数:208次

前言: 甲硝唑 (Metronidazole, MTZ) 是畜牧业生产中常用的一种硝基咪唑类药物,具有抗厌氧菌 和抗原虫作用,主要用于治疗鸡、火鸡的组织滴虫病、牛毛滴虫病,还可与其它抗生素联 合,用于治疗厌氧菌感染。但研究表明,该物质对人体具有神经毒性和潜在致癌性。鉴于 此,欧盟和美国食品药品监督管理局禁止在动物源性食品中使用甲硝唑等硝基咪唑类药 物。2002 年 12 月,我国农业部修订了《动物性食品中兽药高残留限量》,规定可使用 甲硝唑治疗动物疾病,但禁止以抗应激、提高饲料报酬、促生长为目的将该药物用于所有 食品动物,并规定所有食品动物可食性组织中甲硝唑的高残留限量为零。为保障食品安 全,建立动物性食品中甲硝唑残留的检测方法势在必行。 本研究利用 Agilent Bond Elut Plexa PCX 固相萃取柱净化鸡肉样品,并使用 Agilent 1290 Infinity II 液相色谱系统/ 6460 三重四极杆液质联用系统分析样品中的甲硝唑残留。

甲硝唑分析 对试料进行样品前处理。从所取全部样品中取出可食部分约 500 g,剔除筋膜,用组织 匀浆机充分捣碎均匀,转入洁净容器中,密封并标记,于 –18 °C 以下冷冻存放。称取均 质样品 4 g(至 0.01 g)于 50 mL 具塞聚丙烯塑料离心管中,加入 40 μL 200 μg/L 同位素内标工作液(将甲硝唑13C2- 15N2 标准品溶于甲醇从而完成制备),加入 4 mL 4% 氯化钠水溶液(分析纯度),涡旋混匀,超声处理 5 min,加入 20mL 乙酸乙酯(色谱纯 度)提取,涡旋混匀,9000 r/min 4 °C 离心 5 min,取 5 mL 上清液于 40 °C 氮气下吹 干,用 5 mL 0.1 mol/L 盐酸溶液复溶待净化。使用 Agilent Bond Elut Plexa PCX 固相萃取柱对所得样品提取液 进行净化和富集,具体操作如下:Plexa PCX 固相萃取柱依次 用 5 mL 甲醇和 5 mL 纯水活化。将 5 mL 样品提取液分两次过 柱,依次用 0.1% 甲酸(色谱纯度)水溶液和甲醇(色谱纯度) 各 5 mL 淋洗,抽干柱子,用滤纸将柱子擦干净,用 5 mL 5% 氨 化甲醇分两次洗脱,收集洗脱液,40 °C 氮气吹至近干,用 1 mL 流动相重新溶解,过 0.2 μm Agilent Captiva RC 滤膜后,供仪器 测定。 随后,使用 Agilent 1290 Infinity II 液相色谱系统/6460 三重四极 杆液质联用系统对其中的甲硝唑残留进行分析。液相色谱条件和 梯度程序如表 1 所示,质谱分析条件和部分质谱仪参数分别如 表 2 和表 3 所示。




本文采用同位素标记内标法定量。用甲醇溶解甲硝唑标准品, 制备得到 100 μg/L 标准工作液,并逐级稀释、配制得到 0.1、 0.25、0.5、1.0、2.5、5、10 μg/L 系列标准溶液,并加入内标 工作液(同位素标记内标为甲硝唑13C2- 15N2),使内标浓度均为 2.0 μg/L。以标准溶液浓度为横坐标,待测组分与内标物的峰面 积之比为纵坐标绘制标准曲线,按内标法计算样品中甲硝唑的含 量。通过绘制曲线得到,在 0.1–10 µg/L 线性范围内,甲硝唑的 线性相关性良好,相关系数 r > 0.995。

样品中待测物色谱峰的保留时间与相应标准色谱峰的保留时间一 致,变化范围应在 ±2.5% 之内。待测化合物定性离子的重构离 子色谱峰的信噪比 (S/N) ≥ 3,定量离子重构离子色谱峰的信噪 比 (S/N) ≥ 10。同一检测批次,样品中的两个子离子的相对丰度 比与浓度相当的标准溶液相比,各离子对的相对丰度应与校准溶 液的相对丰度一致,误差不超过表 4 中规定的范围。质谱分析所 得的色谱质谱图如图 1 所示,样品及样品加标总离子流图如图 2


在 0.5、1、2 μg/kg 的加标浓度下,每个加标浓度平行测定 6 次,进行方法回收率讨论。如表 5 所示,甲硝唑的回收率为 78%–96%,RDS ≤ 6.1%,表明该方法的回收率和精度完全满足甲 硝唑的定量分析要求。 每 10 个样品测定 1 个加标回收率,样品数小于 10 个,至少测定 1 个加标回收率。回收率实验采用 0.5、1、2 μg/kg 三个加标浓 度,每个加标浓度平行测定 6 次,回收率和精度见表 5。通过对 加标样品的总离子流图进一步分析得到,按 3 倍信噪比测得的检 测限 (LOD) 为 0.5 µg/kg,以 10 倍信噪比测得的定量限 (LOQ) 为 1.5 µg/kg。

本文所述使用 Bond Elut PCX 固相萃取柱和 1290 Infinity II 液相色谱系统/6460 三重四极杆液质联用系统分析鸡肉样品中甲硝唑的 方法线性范围宽、样品回收率高、质谱信号良好,而且具有优异 的检测限 (LOD) 和定量限 (LOQ),在动物性食品兽药残留分析领 域有很好的应用前景。
 

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