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使用UPC2 /MS/MS对蛋白沉淀血浆中的极性化合物直接进样

发布时间:2020-11-19   点击次数:249次

目的 :对蛋白沉淀血浆中的强极性化合物直 接进样分离,以进行生物分析。

背景 :大多数生物分析方法都采用蛋白质沉淀 (PPT)提取法,这是因为该技术简单、快速 且成本较低。典型的PPT使用3:1的有机溶 剂与生物样品,可得到大约75%的有机提 取物。传统上,通常会采用反相液相色谱 (RPLC)分析样品。 对于强极性化合物而言,由于强溶剂作用 产生的色谱峰形较差,明显的是出现 峰前伸和/或谱峰分叉,因此不能直接将高 浓度有机提取物注入RPLC系统。因此,在 向色谱系统进样之前需要进行额外的样品 处理,包括蒸发和复溶或用水稀释。 

通过从RPLC到UPC2 改变MS入口技术,无需蒸发和 复溶等额外样品制备步骤,便可以直接进样分 离高度有机样品中的极性化合物。

 

 解决方案 :UltraPerformance Convergence Chromatography™ (UPC2®)使用超临界二氧化碳作为主要流动相, 其保留机制与RPLC不同,可直接进样高度有机 提取物。 在本示例中,通过PPT提取法使用乙腈以3:1的 比率从大鼠血浆中提取了四种极性较强的化 合物,直接进样至ACQUITY UPC2 ™系统中,并使 用传统RPLC系统作为对比。UPC2 分析在ACQUITY UPC2 BEH色谱柱上进行,采用经氢氧化铵改性 的甲醇作为共溶剂(流动相B)。RPLC分析在配 备ACQUITY UPLC BEH C18色谱柱的ACQUITY UPLC®系 统上进行,采用水和经氢氧化铵改性的乙腈 作为流动相。 图1将含咖fei因的PPT提取物在ACQUITY UPLC系统 中的1 µL直接进样和3 µL直接进样与在ACQUITY UPC2 系统中的7 µL进样进行了对比。RPLC中的 1 µL进样显示出良好的峰形,但在3 µL进样体积 下峰形发生变形,可以观察到前伸峰和谱峰分 叉。而采用UPC2 进行的7 µL进样依然表现出良好 的峰形。 以相同方式测试的其它极性分子也观察到类似 的结果(表1)。表1还显示了使用RPLC和UPC2 时, 在PPT提取物中测试的所有分析物的大进样体 积。

 

这些数据明确证实了使用沃特世ACQUITY UPC2液相色谱系统分析高度有机提取物中极 性化合物的优势,并且不必像RPLC系统那样在进样前需要进行额外 的样品制备,从而简化了工作流程。

总结:通过从标准RPLC到UPC2 改变MS入口技术,无需蒸发和复溶等额外样品 制备步骤,便可以直接在ACQUITY UPC2 系统中注入溶于高度有机样品 中的极性化合物。为生物分析实验室增添UPC2 可以简化高度有机样品 制剂中极性化合物的分析。

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