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模拟 Agilent 1200 系列四元液相色谱仪分析抗组胺

发布时间:2020-12-30   点击次数:303次

摘要:安捷伦的智能系统模拟技术 (ISET) 可实现常规液相色谱系统分析方法的无缝转移,例如 Agilent 1200 系列四元液相色谱仪到 Agilent 1260 Infinity II Prime 液相色谱仪。本应用简报展示了 ISET 在分析五种抗组胺药物方面的优势。对不同实验的保留时间与分离度进行评估,并与采用 1200 系列四元液相色谱仪获得的原始数据进行比较。通过启用 ISET,两种系统获得了良好的一致性。

 

前言从常规 HPLC 系统到 Agilent 1260 Infinity II Prime 液相色谱仪等 UHPLC 系统的分析方法转移,对各种实验室都是重要而且通常很关键的问题,对处于严格监管环境下的实验室更是如此。UHPLC 系统与常规 HPLC 系统相比具有更低的系统延迟体积,并且通常会表现出不同的泵混合行为。这些特性可能会导致仪器间的方法转移产生不同的保留时间 (RT) 和分离度。为避免对传统分析方法进行费时又昂贵的重新验证,可以在开始运行时配置等度保持或部署安装额外延迟体积1 。而采用本方法时仅需要考虑延迟体积,而不用担心两种分析泵混合行为的差异。安捷伦的智能系统模拟技术 (ISET) 可实现无缝的方法转移,并能够获得相似的色谱结果2 。通过启用 ISET,无需改变分析方法或修改液相色谱系统就可以补偿延迟体积和泵混合行为的差异。本应用简报介绍了五种抗组胺药物混合物的分离方法。首先将该药物混合物在 Agilent 1200 系列四元液相色谱仪上进行分析。然后将分析方法转移至 Agilent 1260 Infinity II Prime 液相色谱仪,并分别选择启用与不启用 ISET 功能进行实验。在额外实验中使用 ISET 的微调选项来展示如何对分析方法转移进一步优化。对保留时间与分离度进行评估,并与采用 1200 系列四元液相色谱仪的结果进行比较。

 

实验部分仪器采用以下仪器对抗组胺药物进行分析。 Agilent 1200 系列四元液相色谱仪: • Agilent 1200 系列四元泵 (G1311A) • Agilent 1200 系列自动进样器 (G1329A) • Agilent 1200 系列柱温箱 (G1316A) • Agilent 1200 系列二极管阵列检测器 (G1315D) Agilent 1260 Infinity II Prime 液相色谱仪: • Agilent 1260 Infinity II 全能泵 (G7104C) • Agilent 1260 Infinity II Multisampler (G7167A),配备集成式样品冷却装置(选件 #100) • Agilent 1260 Infinity II 高容量柱温箱 (G7116A) • Agilent 1260 II 二极管阵列检测器 (G7117C)

 

软件 Agilent OpenLAB CDS 2.2 (M8413A) 样品五种抗组胺药物混合物,每种浓度为 150 ng/µL(按洗脱顺序排列):曲吡那敏、氯苯那敏、丁卡因、异丙嗪和西替利嗪。化学品所有试剂均为液相色谱级。新制超纯水产自配置 0.22 µm 膜式终端过滤器 (Millipak) 的 Milli-Q Integral 水纯化系统。所有抗组胺药物均购自 Sigma-Aldrich 公司 (St. Louis, USA)。

 

结果与讨论采用常规分析方法在 1200 系列四元液相色谱仪上使用填充 3.5 µm 填料的 4.6 × 75 mm 色谱柱对五种抗组胺药物进行分析。首先,在不启用 ISET 的状态下将分析方法转移至 1260 Infinity II Prime 液相色谱仪。与预期结果相同,所有五种分析物保留时间均明显提前。接下来,启用 ISET 功能。图 1 所示为叠加色谱图,包括使用 1200 系列四元液相色谱仪的原始色谱图以及启用和不启用 ISET 时采用 1260 Infinity II Prime 液相色谱仪测得的两幅色谱图。使用 ISET 时,抗组胺药物的 RT 能够与原始色谱图保持一致,并显示 RT 偏差小于 3%,很好地满足了 ISET 指标 5%2 的要求。相比之下,不使用 ISET 时,RT 偏移在 5% 至约 11% 之间。为进一步优化保留时间的一致性,需要激活 ISET 的微调功能。延迟体积偏移为 –50 µL 时,所有峰的保留时间略微提前。图 2 所示为叠加色谱图,包括原始色谱图以及 ISET 激活与未激活微调功能时采用 1260 Infinity II Prime 液相色谱仪获得的两幅色谱图。由于配置了微调功能,五种抗组胺药物的 RT 与原始色谱图一致,并显示保留时间偏移的偏差小于 0.5%。表 2 所示为进行实验的保留时间数据概览。

 

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