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使用 Agilent色谱柱快速检测银杏叶软胶囊中的槐角苷

发布时间:2021-01-21   点击次数:201次

摘要:本文介绍了用于普通 HPLC上的快速液相分析方法。文中使用 Agilent InfinityLab Poroshell 120 SB-C18 色谱柱分析槐角苷对照品及银杏叶提取物制品,目标物峰形良好,能够有效 与样品中的杂质分离,得到准确的测定结果。同时与采用 Agilent 5 TC-C18 (2) 色谱柱的 常规方法进行对比,本方法经过简单的方法转换,即可缩短约 60% 的分析时间。该方法 适用于银杏叶提取物中槐角苷的快速、高效分析。

 

前言: 银杏叶中主要活性成分为黄酮类化合物,具有一定的扩血管作 用,可辅助治疗心脑血管疾病。市场上有各种银杏制品,银杏叶 片、软胶囊和滴丸皆为常见的银杏叶提取物制品。但银杏中还含 有有毒的银杏酸,在提取工艺中需尽可能减少银杏酸成分含量。 为了保证银杏叶制品的质量,《中国药典》中明确规定了银杏叶 提取物检测总黄酮醇苷含量及银杏酸限量。其中总黄酮醇苷的含 量,由分别测得的槲皮素含量、山柰素含量及异鼠李素含量按照 公式换算获得。 槐角提取物中同样含有槲皮素、山柰素及异鼠李素,并且不含有 毒成分银杏酸。但从银杏叶与槐角两味药材在《中国药典》中的 描述看到,两者功效不同。在生产过程中存在以槐角苷提取物代 替银杏叶提取物的现象属于掺假行为,而原有方法无法区分。 中国食品药品检定研究院研究制定了多个有关银杏叶制品的检 测方法,并发布了《银杏叶软胶囊中槐角苷检查项补充检查方 法》。此方法采用 Agilent 5 TC-C18 (2) 色谱柱(4.6 × 250 mm, 5 μm,部件号 588925-902),简单有效,可准确测定槐角苷的 含量。 本文在此基础上开发了快速液相色谱方法,采用 Agilent InfinityLab Poroshell 120 SB-C18 色谱柱(4.6 × 100 mm,2.7 μm,部件号 685975-902),在 20 min 内完成分析,大大缩短分析时间。同时 兼容常规液相色谱系统,可在普通液相色谱系统上实现快速分析 需求

 

 实验部分:仪器与试剂 采用 Agilent 1260 Infinity 液相色谱系统,配备如下安捷伦模块: 四元泵(部件号 G1311A)、自动进样器(部件号 G1367D)、柱 温箱(部件号 G1316A)、二极管阵列检测器(部件号 G4212A)。 色谱柱选用 Agilent InfinityLab Poroshell 120 SB-C18(4.6 × 100 mm, 2.7 μm,部件号 685975-902)。 甲醇、乙腈、磷酸为色谱纯级,购于迪马公司;所用实验用水为 Millipore Milli-Q 超纯水系统现制备的高纯去离子水;槐角苷对照 品购于中国药品生物制品检定所;样品为市售产品。 槐角苷对照品溶液配置 取槐角苷对照品适量,精密称定,加 80% 甲醇水溶液制成每 1 mL 含 20.0 μg 槐角苷对照品的溶液,作为对照品溶液。 样品前处理 取约相当于总黄酮醇苷 9.6 mg 的样品粉末,精密称定,置于 具塞锥形瓶中,精密加入 80% 甲醇水溶液 20 mL,密塞,称定 重量,超声处理 20 min。取出,放冷,再称定重量,用 80% 甲醇溶液补足减失的重量,摇匀,过滤。取续滤液,待测。 液相色谱条件 色谱柱: InfinityLab Poroshell 120 SB-C18 流速: 1.0 mL/min 进样量: 4 μL 柱温: 40 °C 流动相: A) 0.4% 磷酸水溶液 B) 乙腈 C) 甲醇 梯度程序: 时间 (min) A% B% C% 0.0 77 8 15 8.0 67 8 25 16.0 42 8 50 16.1 77 8 15 20.0 77 8 15 检测器:260 nm

 

结果与讨论:按照本文所述实验方法,使用 InfinityLab Poroshell 120 SB-C18 色谱柱,对银杏叶软胶囊中的槐角苷进行分析,分析结果满足分 离及检测要求,槐角苷对照品溶液和样品溶液的色谱图如图 1、2 所示。 其中,两个待测样品中二号样品为已知阳性样品,一号样品为未 知样品。按照《银杏叶软胶囊中槐角苷检查项补充检查方法》中 结果判断方法,使用槐角苷对照品定位,并比对 210-400 nm 波 长范围内的紫外光谱图,二号样品判定为阳性检出,与已知结果 一致;一号样品中保留时间相同的色谱峰,由于光谱图不同(槐 角苷在 259 nm 显示大吸收),判定为合格产品,对照品溶液、 样品溶液的叠加光谱图如图 3 所示。 通过进一步对比常规柱方法和本文所述快速方法的色谱图得到, 在保证分离及检测要求的前提下,快速方法可在 20 min 内完成 分析,缩短了约 60% 的分析时间,如图 4 所示。

 

结论 :此方法使用采取表面多孔层填料技术的 Poroshell 色谱柱,利用 其柱效与亚二微米填料相当的特点,在满足分离度的基础上,达 到快速分析的效果。同时 Poroshell 色谱柱的压力大约只有亚二 微米填料的 50%,可应用于 UHPLC 和常规 HPLC 系统上。 本文随机选取两个不同厂家的银杏叶软胶囊,按照建立的快速方 法检测。由实验结果看出,Poroshell 120 SB-C18 能够提供较好 的分离及良好的峰形,满足方法中柱效不低于 40000 的要求。且 方法分析周期 20 min,缩短了约 60% 的分析时间,大大提升分析 效率。此外,本文所述方法操作简便,可准确测定槐角苷的含量。

 

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