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使用沃特世ACQUITY UPLC I-Class分析饲料中的抗球虫剂

发布时间:2021-02-25   点击次数:113次

应用优势:使用沃特世ACQUITY UPLC ® I-Class高效液相色谱系统和Xevo ® TQ-S开 发出一种检测饲料样品中的11种抗球虫剂 的快速、稳健、准确和灵敏的方法。 ■ 与原有HPLC/MS-MS方法相比,饲料样品提 取物可进一步稀释50倍,进样体积只有 原来一半。 ■ 运行时间从16 min(HPLC/MS-MS)缩短至 8 min(UPLC/MS-MS)。 ■ RADAR™能够提供关于基质效应的相关信 息,因此是方法开发的一种重要工具。

 

 简介: 球虫病是一种由原生动物球虫引起的动物肠道寄生虫病。这种疾病通 过接触受感染的粪便或摄入受感染的组织在动物之间传播。主要症状 为腹泻,严重时变为便血。大多数动物感染球虫后无症状;但是动物 幼体或免疫力低下的动物可能会出现包括死亡在内的严重症状。其中 家养动物、工业化饲养的家禽和兔子为易感群体。 目前,根据欧盟法规2003/1831/EC,11种抗球虫剂经批准可作为饲料添 加剂。其它一些法规还规定了可用于特定动物物种的抗球虫剂。由于 饲料公司常会用同一生产线生产不同的饲料,因此难以避免残留的抗 球虫药发生批次间转移。饲料公司本身努力避免交叉污染,并且欧盟 发布指令2005/183/EC规定了抗球虫药的大残留浓度(2009/8/CE)以 保护动物健康并将对消费者的风险降至低。该指令规定饲料的大 残留浓度:用于敏感动物物种的为1 %,相对不敏感的非标靶动物物种 为3 %。表1中示出的所需LOQ水平取决于药物,根据提取方案做进一步 限定。这些LOQ浓度差异较大,难以在一次多残留分析中,分析所有组 分并实现良好的灵敏度、准确度和线性范围。 此外,饲料是非常复杂的混合物。通常情况下无法对每种饲料使用基 质匹配校准法或标准品加入法,而是采用内标法和只对某一种饲料基 质。基于同种饲料基质,在不同浓度下进行加标回收率实验,以验证 方法的准确度。

 

 *,基质可显著改变电喷雾电离的响应,可能使信号增强,但更可能的是抑制信号。 通过减少源区中基质离子的量可以使基质效应小化。一种途径是通过稀释样品实现(如 果所用的方法足够灵敏,则此途径可行),使得加载到色谱柱上的基质减少,在常规食品和饲 料检测实验室工作时也无需频繁清洗仪器,从而延长了仪器的正常工作时间,提高了方法的稳 健性。

 

本应用纪要介绍了一种快速、准确且稳健的UPLC/MS-MS方法,该方法利用Waters ® ACQUITY UPLC I-Class和Xevo TQ-S系统检测饲料中残留浓度低至0.25 %的11种抗球虫剂。Xevo TQ-S是一种高灵敏的 串联四极杆仪器,具有快速转换正/负离子的功能,能够应对颇具挑战性的基质。

 

实验 样品制备 本方法参考先前应用于HPLC-MS-MS的方法,对其进行了适当的转换以用于UPLC ®,除此之 外还包括终的稀释步骤。 1. 称取5 g研磨均匀的饲料样品,放至50 mL一次性离心管中。 2. 加入50 µL内标混合溶液(50 µg/mL氯苯胍-d8、尼日利亚菌素,25 µg/mL DNC-d8,5 µg/mL 地克珠利-bis、癸氧喹酯d5)。 3. 加入10 mL 10 % Na2CO3溶液,手动振荡。 4. 加入15 mL乙腈。 5. 振荡30 min。 6. 在2000 rpm (4 ℃)下离心5 min。 7. 将上清液转移至50 mL试管中。 8. 再次用乙腈提取,合并两次所得的有机提取物。 9. 将1 mL提取物转移至玻璃管中,并用初始流动相将样品稀释50倍。

 

UPLC条件 系统: ACQUITY UPLC I-Class 色谱柱: ACQUITY BEH C18 2.1×100 mm 柱温: 50 ℃ 样品温度: 10 ℃ 进样: 10 µL 流动相: A 0.1 %甲酸水溶液 B 0.1 %甲酸和甲醇混合液 梯度如表2所示。 MS条件 MS系统: Xevo TQ-S 极性: ES +/- 毛细管电压(kV): ES+为1.00, ES-为3.00 源温度: 150 ℃ 脱溶剂气温度: 500 ℃ 锥孔气体流速: 150 L/h 脱溶剂气流速: 1200 L

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结论 利用ACQUITY UPLC I-Class/Xevo TQ-S系统,开发出一种快速、 稳健、准确和灵敏的分析方法,用于检测饲料样品中11 种抗球虫药。与原有HPLC/MS-MS方法相比,饲料样品提取 物可稀释50倍,进样体积只需原来的一半。这使清洗仪器 的频率降低,延长了仪器的正常运行时间,提高了检测的 可靠性。RADAR功能能够提供关于基质效应的信息,是方 法开发的一种重要工具。

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