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在生物药品分析中的应用~培养液的氨基酸监测~

发布时间:2021-07-10   点击次数:331次

生物药品多为通过细胞培养生产的蛋白质类药品。在蛋白质生产的培养工序中,对溶氧量、PH值、温度等各种工艺参数的监测或 控制至关重要。另外培养液中的氨基酸是重要的营养源,因此该监测有助于掌握细胞状态、研讨培养条件、研究最佳培养液组成。 此次我们向您介绍使用L-8900全自动氨基酸分析仪,对在不同培养条件下的培养液中的各种氨基酸浓度进行监测的结果。能 够进行多成分同步分析并具有的定量精度的氨基酸分析仪,以其高分离度而著称,可为培养工序的研究开发及品质管理提供 有价值的信息。

 ■氨基酸监测的样品和色谱条件

<生理体液分析法色谱条件> 色谱柱 : #2622PF 4.6 mm I.D. × 60 mm 保护柱 : #2619F 4.0 mm I.D. × 5 mm 脱氨柱 : #2650L 4.6 mm I.D. × 40 mm 流动相 : PF Buffer Kit 流速 : 0.35 mL/min 柱温 : 32 ~ 70 ℃ 反应液 : Ninhydrin coloring solution kit for HITACHI 反应液流速 : 0.3 mL/min 反应温度 : 135 ℃ 检测波长 : VIS 570 nm、440 nm 进样量 : 20 μL

 

<样品> 细胞 : CHO细胞 (CRL-9606) 培养槽 : 1 L 通风 : 仅液面通风(Air、O2、N2、CO2的混合气体) 培养基 : Ham’sF12 + 10 % FBS 在以下条件的培养过程中,定时采样,进行了分析。

 

<预处理> 培养液与浓度5%的三氯yi酸溶液以1 : 1混合 ↓ 离心分离 10,000 rpm、10 min ↓ 过滤 Pore Size 0.2 μm ↓ 分析用样品

・标准样品的测定中,此次介绍的氨基酸中,Thr、Gly、Ala的峰保留时间的重现性为RSD = 0.05 ~ 0.07 %,峰面积的重现性为 RSD = 0.15 ~ 0.19 %,得以确认茚三酮柱后衍生法的高度重现性。(均为 n=3)(产品规格如下。峰保留时间的重现性:0.5 % 以内(Ala)、0.3 % 以内(Arg);峰面积的重现性:1.5 % 以内(Gly、 His))

・通过监测培养液中各种氨基酸的浓度,可获知培养过程中各成分的盈缺,因此有助于探讨最佳培养液组成。另外,基于培养条件 的不同,可见日立氨基酸含量的变化出现差异的成分。可以认为这反映出细胞内的处理过程已发生变化,产生的蛋白质也可能不同, 因此培养液中氨基酸的同步监测可作为抗体药物生产领域中生产管理的有效指标之一。

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