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高效液相色谱-荧光检测法测定饲料中的乙氧酰胺苯甲酯

发布时间:2021-07-26   点击次数:135次

前言:乙氧酰胺苯甲酯,又名衣索巴,俗名球虫酯,是尼卡巴嗪和氨丙啉等抗球虫药的增效剂。该药品抗球虫作用及机理与磺胺药和抗菌增效剂相同,本身具有抗原虫活性,它通过干扰四氢叶酸的合成阻止裂殖体的正常发育,从而产生抗球虫作用。2020 年农业农村部公告第 316 号-6-2020 饲料中乙氧酰胺苯甲酯的测定 高效液相色谱法正式颁布。本文所述方法以此标准为基础,重点优化了前处理流程。本方法采用 AgilentBond Elut AL-N 柱对样品进行萃取和净化,并利用安捷伦 Poroshell 120 SB-C18 色谱柱对目标物进行快速分析,荧光检测器进行检测,方法检测限为 0.0048 μg/g,定量限为 0.016 μg/g。该方法简化了公告标准中的前处理方法,在一定程度上节约了分析成本,提高了分析效率。对于基质更为复杂的饲料样品,仍需参考农业农村部公告第 316 号-6-2020 所规定检测方法。

乙氧酰胺苯甲酯的分析样品前处理及分析条件取饲料样品 5 (±0.05) g,于 50 mL 离心管中。根据生产实际需要,按照表 1 所示添加水平,向饲料样品中添加乙氧酰胺苯甲酯标准品,制备得到加标样品,用于考察方法的稳定性和准确度。

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加标后,将饲料混合均匀,静置过夜。加入 20 mL 乙腈萃取,涡旋混合 1 min,超声 10 min,5000 r/min 离心后取 10 mL 上清液在 30–40 °C 下氮吹近干;复溶于 5 mL 正己烷:丙酮 (v/v, 9:1)中;涡旋混合 1 min,超声 10 min,5000 r/min 离心 10 min,上清液经过 Bond Elut Al-N SPE 柱进行净化处理(SPE 流程见图 1);接收洗脱液,氮吹近干后,用 1 mL 甲醇重新定容,供LC-FLR 检测,分析条件如表 2 所示。每个加标样品分别做三个平行样品进行测定。


色谱分析条件的优化色谱分析采用安捷伦的 Poroshell 120 EC-C18 色谱柱,在普通液相色谱仪上可以实现快速分析。8 min 内即可完成整个方法的运行。由图 4 可以看出,连续进样 6 针,色谱图基本完全重合,表明方法具有重复性。在 0.1–20.0 μg/g 范围内,仪器具有良好的线性,线性相关系数 R2 为 0.9989,见图 4。


结论本方法基于 Agilent Bond Elut AL-N SPE 柱,结合 Poroshell 120SB-C18 快速色谱柱,在普通液相色谱仪上实现了对饲料中乙氧酰胺苯甲酯的含量分析。方法准确度和精密度均可达到标准要求,同时简化了前处理方法,大大提高了分析效率。该方法适用于实际生产中饲料中乙氧酰胺苯甲酯含量的测定。


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