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三重四极杆液质联用系统定量分析替丁类药物中的 N-亚 硝基er甲胺

发布时间:2021-08-09   点击次数:392次

摘要:本应用简报介绍了采用 Agilent 6470 三重四极杆液质联用系统检测替丁类药物中的 N-亚 硝基er甲胺 (NDMA) 的方法。该方法可以有效避免替丁类药物受热不稳定而分解出亚硝胺 的问题,检测结果准确、重现性好、特异性强,且灵敏度优于 NDMA 目前的法规*要 求(96 ng/天)。该方法适用于对盐酸雷尼替丁、枸橼酸雷尼替丁、尼扎替丁、西咪替丁 和法莫替丁等替丁类药物和制剂中的 NDMA 进行快速、准确的定量分析。


前言: 2019 年 9 月,FDA 爆出胃药雷尼替丁中含有超过*的亚硝胺类致癌物 N-亚硝基er甲胺 (NDMA),随后出现大量涉及多个品牌的雷尼替丁药品召回事件[1]。这是继沙坦类药 物后,第二种被爆出含有超*亚硝胺类杂质的药物,并使得监管机构对其它可能遭受污 染的化学合成药物越来越警惕。

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N-亚硝基er甲胺 (NDMA),又称二甲基亚硝胺 (CAS 64-75-9), 结构如图 1 所示,具有很强的肝脏毒性,属于亚硝胺类遗传毒性 杂质。根据世界卫生组织国际癌症研究机构公布的致癌物清单, NDMA 属于 2A 类致癌物,即“对人很可能致癌,此类致癌物对 人致癌性证据有限,对实验动物致癌性证据充分"[2]。根据 FDA 之前的评估结果,将 NDMA 可接受*规定为 96 ng/天[3]。而 雷尼替丁 (Ranitidine) 的结构中含有亚硝胺类似基团(见图 1), 根据 FDA 的研究[1],其受热后会分解出 NDMA。因此,不适合采 用 GC-MS 检测雷尼替丁,而需要利用更温和的 LC-MS 技术。同 样,从结构角度来看,在其他替丁类药物的分析中也要考虑热不 稳定问题。 关于雷尼替丁中 NDMA 的检测,FDA 在 2019 年 9 月公布了 LC-HRMS 和 LC-MS/MS 方法[1];欧洲 OMCL 实验室推荐采用 LC-MS/MS 方法[4];同期,我国药品监管部门也发布了雷尼替丁 的推荐 LC-MS/MS 检测方法,并于同年 10 月,将方法扩展到 其他替丁类药物(枸橼酸雷尼替丁和尼扎替丁等)。值得一提的 是,在三大机构的推荐方法中,都用到安捷伦三重四极杆液 质联用系统。 本研究依据中国食品药品检定研究院替丁类药物中 NDMA 推荐检 测方法的要求,采用定量的金标准三重四极杆液质联用系统进行 测试。该方法有效避免了替丁类药物受热不稳定而分解出亚硝胺 的问题,灵敏度高、特异性强且重现性好,适用于定量分析盐酸 雷尼替丁、枸橼酸雷尼替丁、尼扎替丁、西咪替丁和法莫替丁等 替丁类药物中的 NDMA。


实验部分:试剂和样品 甲醇为质谱级,甲酸为色谱级,购自 Merck;所用实验用水为利 用 Millipore Milli-Q 超纯水系统现制备的高纯去离子水;NDMA 标 准品溶液及样品由合作用户提供。 仪器和设备 采用 Agilent 1290 Infinity II 超高效液相色谱系统与 6470 三重四极 杆质谱联用,其中色谱系统配备二元泵(部件号 G7120A)、自动 进样器(部件号 G7167B)和柱温箱(部件号 G7116B),质谱系 统配备大气压化学电离 (APCI) 离子源。为确保替丁类药物与 NDMA 有效分离,色谱柱选用 Agilent EclipsePlus C18 RRHD(3.0 × 150 mm, 1.8 µm,部件号 959759- 302)。


标样配制 取 NDMA 标准品溶液(1000 mg/L 甲醇溶液),用适当溶剂(与 样品前处理采用相同的溶剂)逐级稀释成每 1 mL 中分别含 1、 2、5、10、50、100、500 ng 标准品的溶液,作为校准标样。并 将 1 ng/mL 溶液稀释三倍,作为灵敏度测试溶液。 样品前处理 对于原料药,建议称取日最大摄入量。加 10 mL 水或甲醇(取决 于药物溶解度),振摇使其溶解后,离心,取上清液检测。 制剂和片剂经预先研磨后称重,胶囊则取内容物称重,建议称 取日最大摄入量。加 10 mL 水或甲醇(取决于药物溶解度),摇 匀,涡旋混合 1 min,再振摇 40 min,离心后取上清液进行检 测。由于替丁类药物热稳定性差,因此应避免使用可能产热的剧 烈操作(如超声等)。 液相色谱条件 色谱柱: EclipsePlus C18 RRHD, 3.0 × 150 mm, 1.8 μm 流速: 0.4 mL/min 柱温: 40 °C 流动相: A) 0.1% 甲酸水溶液 B) 甲醇 梯度程序: 时间 (min) B (%) 0.00 5.00 3.50 5.00 4.50 20.00 4.60 100.00 10.00 100.00 10.10 5.00 11.00 5.00 后运行时间: 2 min


质谱条件 离子源: APCI 离子源 雾化气、干燥气及碰撞气: 氮气 雾化气压力: 35.0 psi 干燥气温度: 300 °C 干燥气流速: 5 L/min 蒸发室温度: 350 °C VCap 电压: 1500 V 电晕针电流: 6 μA 检测模式: 多反应监测 (MRM) MRM 参数: 如表 1 所列

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结果与讨论:色谱分离结果 本研究选择适合的反相色谱柱,结合梯度洗脱,利用 NDMA 的弱 保留性,使其与高浓度替丁类药物分离。同时利用药典推荐的紫 外吸收信号监测高浓度药物的洗脱情况,结果如图 2 所示,所有 替丁类药物均在 NDMA 后洗脱,不会干扰 NDMA 的测定。本实 验条件下,NDMA 的保留时间约为 3.5 min,与各类替丁药物分 离良好。 为避免污染质谱系统,在 NDMA 出峰前后,推荐流路设置“引入 废液"。另外,建议高比例有机相冲洗较长时间,保证高浓度 API 及辅料等物质完全洗脱。



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