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Agilent Ultivo对中药材中 30 种禁用农药进行检测

发布时间:2021-08-19   点击次数:288次

摘要 :本文采用 Agilent Ultivo 三重四极杆液质联用系统建立了药材及饮片中的禁用农药多残留 分析方法。该方法针对不同中药材基质,采用以 QuEChERS 为主的样品前处理方案,符 合中国药典 2020 版对中药残留农药提取和净化的要求;同时以固相萃取法作为对复杂中 药基质净化的补充。分离方法基于 Agilent 1290 Infinity HPLC 和 InfinityLab Poroshell 120 EC-C18 液相色谱柱。所用检测系统为安捷伦配备 Cyclone Ion Guide 气旋离子导 轨及 Vortex Collision Cell 涡流碰撞室的小型化 Ultivo 三重四极杆液质联用系统,该系统 还配备高效抗污染的喷射流 (AJS) 离子源,在正离子模式下完成对 30 种农药的分离和检 测。该方法在不同农药浓度范围内具有良好的线性,相关系数 R2 ≥ 0.9990,定量限均满 足《0212 药材和药片检定通则》[1] 的要求。采用 Agilent Bond Elut QuEChERS 中国药典中 药中农残专用净化包,可有效净化样品,消除基质干扰,使不同中药材基质中的分析物回 收率在 50%–130% 之间。证明安捷伦液质联用系统在满足药典检测要求的基础上,能够 实现对不同药材中农药残留的高灵敏度、高通量检测。


前言:中药材中的主要常见农药残留包括有机氯类、有机磷类、拟除菊酯类、氨基甲酸酯类等。这些农药污染主要源于种植过程中的 滥用农药,其次来源于中药材生长的土壤环境以及采收、储藏过 程中受到的农药二次污染[2]。农药残留与中药材的质量安全密切 相关。科学种植中药材、合理有效使用农药,并将农药残留风险 降到水平,是我国中药材产业健康发展的重要保证[3]。 2019 年 8 月,国家药典委员会拟修订《中国药典》2015 年版四 部“0212 药材和饮片检定通则",对检定对象及限量指标进行了 明确规定,并在第五法(“2341 农药残留量测定法"中公示新 增了“第五法 药材及饮片(植物类)中禁用农药多残留测定法) 中给出禁用农药的具体测定方法。其中第五法要求以 LC-MS/MS 和 GC-MS/MS 为主要检测手段。检测的农药有 33 种,共计 55 种 化合物,并规定所有禁用农药都不得检出(测定含量低于定量限 0.01–0.1 mg/kg)。30 种化合物通过 LC-MS/MS 方法进行检测, 35 种化合物通过 GC-MS/MS 方法进行检测,其中 11 种化合物同 时适用 LC-MS/MS 和 GC-MS/MS 方法。 安捷伦 LC-MS/MS 技术平台具有高选择性、高灵敏度、高通量 和高效率等特点,适用于同时分析基质复杂、类型多样的中药材 中的多种农药残留。本应用简报展示了一种对中药材中 30 种农 药进行分离检测的 LC-MS/MS 方法,该方法将低扩散、低残留 的 Agilent 1290 Infinity HPLC 与 Agilent Ultivo 三重四极杆液质联 用系统结合使用。最优化的 LC-MS/MS 方法同时适用于 Agilent Ultivo、6470、6495 等不同型号的三重四极杆质谱仪器,方法转 化无缝对接。


实验部分:试剂和样品 乙腈为分析纯,购自德国默克 (Merck);甲酸和甲酸铵为分析 纯,购自美国 Sigma-Aldrich 公司;所用实验用水为 Millipore Milli-Q 超纯水系统现制备的高纯去离子水;30 种农药混合标准品 溶液(药典 2341 农残测定 LC-MS)由天津阿尔塔科技公司提供 (部件号 1ST29486),其中各化合物的浓度如表 2 所示。测定的 7 种中药材 白芍、麦冬、板蓝根、黄芩、何首乌、佛手、厚朴等 均来源于正规中药材批发市场。


仪器和设备 液相部分为 Agilent 1290 Infinity 液相色谱系统,该系统主要包括 以下组件: – Agilent 1290 Infinity 二元泵(部件号:G4220A) – Agilent 1290 Infinity 标准自动进样器(部件号:G4226A) – Agilent 1290 Infinity 柱温箱(部件号:G1316C) – 质谱部分为 Agilent Ultivo 三重四极杆液质联用系统,其配备喷 射流 (AJS) 离子源 – 采用 Agilent MassHunter B.10 工作站软件进行数据采集、确 证和定量分析 标准品配制 取混合标准品溶液(其中 30 种农药化合物的浓度各不相同,将 其稀释 1000 倍,即达到药典规定的定量限),用含 30% 水的乙 腈溶液逐级稀释,得到浓度分别为 0.1、0.2、0.5、1、5、25、 50 ng/mL 的标样(以甲an磷为例)。其它农药以相同的比例逐级 稀释,现配现用。

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液相色谱条件 色谱柱: Agilent Poroshell 120 EC-C18, 2.1 × 100 mm, 2.7 µm (部件号 695775-902),或 Agilent Poroshell 120 SB-C18, 2.1 × 100 mm, 2.7 µm(部件号 685775-902) 流速: 0.3 mL/min 柱温: 40 °C 进样体积: 2 µL 流动相: A) 0.1% 甲酸(含 5 mmol/L 甲酸铵)水溶液 B) 0.1% 甲酸(含 5 mmol/L 甲酸铵)乙腈:水溶液 = 95:5 梯度程序: 时间 (min) B% 0.0 30% 1.0 30% 12.0 100% 14.0 100% 14.1 30% 后运行时间: 3 min


质谱条件 离子源: AJS 源 离子模式: 正离子模式 干燥气温度: 250 °C 干燥气流量: 6 L/min 鞘气温度: 350 °C 鞘气流量: 11 L/min 雾化器压力: 45 psi 毛细管电压: 4000 V 喷嘴电压: 0 V MS1 和 MS2 分辨率:单位 监测模式: 动态多反应监测 (dMRM) MRM 参数: 如表 1 所示,涵盖 2015 版药典第五法 中所要求离子;并添加部分高强度离子, 用“**"标注,作为定性参考依据。


结果与讨论 如图 2 所示,采用上文所述的色谱和质谱条件,在 10 min 内即可完成对购买的标准品通过稀释后配制的 30 种农药混合标 准品溶液进行色谱分离,且各化合物之间的分离效果及色谱峰形均满足药典分析要求,同时展现了薄壳填料型 C18 色谱柱 优越的分离性能。

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结论 本方法采用 Agilent 1290 Infinity UHPLC 结合 Ultivo 三重四极杆液 质联用系统建立了对应于《中国药典》规定的农药残留 LC-MS/MS 分析方法。该方法灵敏度高、专属性强,能够结合 Agilent Bond Elut QuEChERS 快速前处理方法对不同中药材基质中的残留农药进 行准确的定量分析,结果满足 2020 版药典 2341 第五法的要求。


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