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分析尿液中的巴比妥类化合物快速 LC/MS/MS 分析方法

发布时间:2021-09-07   点击次数:152次

摘要:大范围du品检测中的大多数化合物都采用正离子模式进行分析。但是,在电喷雾电 离 (ESI) 负离子模式以及有利于负离子化的流动相 pH 下,获得的巴比妥类化合物和 11-nor-9-羧基-∆9 -THC (THC-A) 结果更出色。本研究开发出一种快速分析方法,通过 交替色谱柱再生 (ACR) 在一次分析中同时分析八种巴比妥类化合物和 THC-A,可提 高样品通量。单独检测易于负离子化的分析物,可以提高化合物的分析灵敏度,从 而提升研究能力。所使用的简单样品前处理技术可在宽动态范围内进行快速分析, 具有良好的分析灵敏度和出色的定量结果。 该分析使用了采用安捷伦喷射流技术的 Agilent 6470 三重四极杆质谱仪(在 ESI 负 离子模式下操作)和 Agilent Infinity II 1290 UHPLC 系统。增加了第二个泵和 2 位 10 通切换阀,以便于使用 ACR。用一份 100 µL 人尿液样品分析巴比妥类化合物和 THC-A。使用由 H2O:乙腈和 5 mmol/L 乙酸铵的混合物和两根 Agilent Poroshell 120 EC-C18 (2.1 × 100 mm, 1.9 µm) 色谱柱组成的梯度方法,在 3 分钟内即可完成分析 物的色谱分离。采用多反应监测 (MRM) 离子对在负离子模式下定量分析各种分析物 和内标。在上述色谱条件下,异戊巴比妥和戊巴比妥同分异构体对未实现分离。在 5–1000 ng/mL 的浓度范围内均获得了良好的线性和重现性,所有分析物的相关系数 均高于 0.995。所有分析物均表现出优异的重现性 (CV < 15%)。本研究开发了一种快 速、准确的高特异性 LC/MS/MS 定量分析方法,通过同时测量尿液中的巴比妥类化 合物和 THC-A 进行了验证。


前言:大范围du品检测中的化合物通常采用正 离子模式进行分析。但是,在负离子模 式以及有利于负离子化的流动相 pH 的 单独测定中,获得的巴比妥类化合物和 11-nor-9-羧基-∆9 -THC (THC-A) 结果更出 色。分析中包括八种巴比妥类化合物和 THC-A(图 1)。其中巴比妥类化合物包 括:异戊巴比妥、仲丁巴比妥、布他比 妥、美索比妥、戊巴比妥、 环己烯巴比妥和司可巴比妥。本研究开 发出一种快速分析方法,通过交替色谱 柱再生 (ACR) 在一次分析中同时分析巴 比妥类化合物和 THC-A,可提高样品通 量。该分析方法使用 LC/MS/MS 同时检 测宽浓度范围内的化合物。校准浓度范 围为 0.1–5000 ng/mL。使用基质匹配的 标样生成标准曲线,按 1:10 的比例稀释 后进样至 LC/MS/MS 系统中。该方法在 Agilent 1290 Infinity II UHPLC 和 Agilent 6470 LC/TQ 质谱仪上开发,分析梯度为 5 分钟。ACR 使进样之间的分析时间减少 26%,只需 3.7 分钟。

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化学品与试剂 用于基质匹配校准品的人尿液购自 Golden West Biologicals, Inc (Temecula, CA)。标 准品和内标购自 Cerillant Corporation (Round Rock, TX)。样品前处理和液相色 谱溶剂购自 Honeywell (Muskegon, MI)。 样品前处理 将标准品加入不含药物的人尿液 (10%) 中。 按 1:2:2:2.5 的模式进行连续稀释,来创建 校准曲线。浓度范围为 0.5–5000 ng/mL。 加入内标至最终浓度为 200 ng/mL。然 后,取 10 µL 进样至 LC/MS 系统。 数据分析 采用 Agilent MassHunter 采集软件 (B.08.00) 进行数据采集。利用 Agilent MassHunter Acquisition Optimizer 软 件获得 MS/MS 离子对,确定最佳的母 离子、子离子、碎裂电压和碰撞能量。 使用 Agilent MassHunter 定量分析软件 (B.08.00) 和定性分析软件 (B.07.00) 分析 数据。

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结果与讨论:色谱 本研究的重点在于提高通量。因此,在上 述色谱条件下,异戊巴比妥和戊巴比妥同 分异构体对未实现分离,并报告为单峰 (图 4)。如果需要分离异戊巴比妥与戊 巴比妥,应调整梯度和运行时间以实现 这些同分异构体之间的基线分离,如图 6 所示。

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定量结果 表 2 显示了所有定量结果。除异/戊巴比妥 和 THC-A(浓度范围为 0.5–500 ng/mL) 外,所有化合物的 10 点校准曲线浓度范 围为 5–5000 ng/mL。所有化合物均在 低至 1 ng/mL(异/戊巴比妥和 THC-A 为 0.1 ng/mL)的浓度下进行分析,信噪比 为 5 或更高。

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结论 本研究将巴比妥类化合物和 THC-A 的检 测结合到单个分析方法中,更重视使用 交替色谱柱再生 (ACR) 提高通量。为获 得快速分析方法,同分异构体异戊巴比 妥和戊巴比妥之间未实现分离,且所有 化合物的初始分析时间均为 5.0 分钟。 结合 ACR 使进样之间的分析时间缩短至 3.7 分钟,从而使通量提高 26%。所有化 合物的校准曲线均呈线性,相关系数为 0.99 或更高。尿液中加标的苯ba比妥、 布他比妥、仲丁巴比妥、司可巴比妥和 美索比妥的 LLOQ 至少为 5.0 ng/mL 或更 佳,而异/戊巴比妥和 THC-A 的 LLOQ 为 0.5 ng/mL 或更佳。 在未来的计划中,将评估通过一系列更多 样品前处理技术处理不同供应商来源的尿 液基质对这种分析方法的潜在干扰。





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