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使用高效液相色谱法测定动物源食品中的氮哌酮及其代谢物残留

发布时间:2021-12-03   点击次数:184次

前言:氮哌酮 (Azaperone) 是一种丁酰苯类神经安定药,动物经肌肉注射此药后可消 除紧张感、降低活动力,使动物对环境淡漠并长期处于安静状态,在长途运输 中常常给猪等动物使用该药。氮哌醇 (Azaperol) 是氮哌酮在动物体内的代谢产 物,与原形药物氮哌酮的化学结构相近。通过食物链,氮哌酮及其代谢产物氮 哌醇会在人体内蓄积,对人体产生直接的危害,其不良反应主要体现为心血管 效应,用药后动脉压下降,皮肤血管扩张使皮肤成粉红色,心率和心输出量 减少。 本文所述方法参照 GB29709-2013,建立了动物源食品中氮哌酮及其代谢物分析 的高效液相色谱法。本方法适用于猪的肌肉、肝、肾中氮哌酮和氮哌醇残留量 的检测。方法利用 Agilent Bond Elut Plexa PCX 固相萃取小柱对样品进行净化,并 利用安捷伦的 Agilent Poroshell 120 EC-C18 快速柱对目标物进行快速分析。


氮哌酮及其代谢物分析 对试样进行样品前处理:称取 5 ± 0.05 g 试样于 50 mL 离心管中,加 10 mL 乙腈, 涡旋 1 min,超声 10 min,5000 r/min 离心 5 min,取上清液于 50 mL 离心管中; 残渣中加 10 mL 乙腈,重复提取一次,合并两次提取液,于 45 °C 氮气吹扫至近 干;加 5 mL 2% 甲酸水溶液于离心管中,涡旋 1 min,超声 5 min 使充分溶解,加 10 mL 正己烷,振荡 5 min,5000 r/min 离心 5 min,弃掉上层正己烷层(包含两相 间的脂肪膜),用氮气吹扫去除残余的正己烷,备用。


所得样品提取液经 Agilent Bond Elut Plexa PCX 固相萃取小柱 净化和富集后(图 1 所示为固相萃取操作流程),使用配备 了 Agilent Poroshell 120 EC-C18 色谱柱的高效液相色谱系统 对其中的氮哌酮及其代谢物进行快速分析(表 1 所示为高 效液相色谱分析条件)。

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本方法在 GB29709-2013 基础上进行了前处理和检测方法 的优化,在保证目标物回收率的情况下,显著降低了各种 组织来源的本底干扰,能获得更低的检测限,同时使分析 方法更加稳定准确,如图 2-4 所示。方法中利用 Bond Elut Plexa PCX 固相萃取小柱对样品进行净化,并利用安捷伦的 Poroshell 120 EC-C18 快速柱对目标物进行快速分析, 方法检测限为 2 µg/kg,定量限为 5 µg/kg;50 µg/kg 加标 水平的猪肾样品连续进样六次考察重现性,氮哌醇峰面积 RSD 值为 0.76%,氮哌酮峰面积 RSD 值为 0.53%,结果表现 出*的重现性,如图 5 所示;在 12.5-1000 ng/mL 线性范 围内氮哌醇和伊氮哌酮的线性相关性良好,如图 6 所示; 在 5-100 µg/kg 的加标水平下,氮哌酮和氮哌醇的回收率为 58.9%-83.8%,RSD 为 0.9%-7%,如表 2-3 所示。

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本方法与 GB 29709-2013 相比,采用了 Bond Elut Plexa PCX 固相萃取小柱对样品进行净化,并利用安捷伦的 Poroshell 120 EC-C18 快速柱对目标物进行快速分析。Plexa PCX 填料是新型的高级聚合物阳离子交换填料,具有更高 的萃取效率。Poroshell 120 EC-C18 快速柱与常规分析柱相比, 在提高柱效的同时显著地缩短了分析时间,这在高通量检 测方面有重要意义。本方法简化了萃取净化的步骤,提高了前处理和色谱分析效率,*国家标准方法要求的 检测限和定量限,获得了较高的回收率与稳定性。因此采 用 Bond Elut Plexa PCX 固相萃取小柱和 Poroshell 120 EC-C18 色谱柱,能够满足 GB29709-2013 规定的对动物源食品中氮 哌酮及其代谢物的测定要求。

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