采用高效液相色谱法测定牛奶中甲砜霉素

前言 甲砜霉素是氯霉素的同类物，抗菌谱和抗菌作用与氯霉素相仿，具广谱抗微生 物作用，主要用于畜禽的细菌性疾病，尤其是大肠杆菌、沙门氏菌及巴氏杆菌感 染。随着氯霉素的禁用，甲砜霉素开始广泛用于动物饲料以及兽药中，进而造成 动物性食品如牛奶和畜肉产品中有少量的甲砜霉素残留，对人体健康也造成一定 的损害。目前，人们普遍认为甲砜霉素防治畜禽疫病的，鉴于动物饲料 生产商或者养殖户任意加大甲砜霉素用量，为监控动物性食品中该药的残留，欧 共体和我国均规定其在食品动物各组织中的最高残留*为 0.05 mg/kg。 本文所述方法参照 GB 29689-2013 国标方法，建立了一种牛奶中甲砜霉素残留分 析的高效液相色谱法。该方法采用乙腈对牛奶样品中甲砜霉素进行提取，同时 使用 Agilent Bond Elut C18 固相萃取小柱对样品进行净化，并利用安捷伦 Agilent Poroshell 120 EC-C18 色谱柱对目标物进行快速分析。该方法适用于牛奶 中甲砜霉素残留量的检测，*国标方法对于牛奶中甲砜霉素残留量检测 要求。

甲砜霉素分析 对试样进行样品前处理：称取试料 5 ± 0.05 g（购买于当地超市），于 50 mL 离心 管中；加乙腈 10 mL，涡旋 1 min，超声 10 min，5000 r/min 0 ºC 低温离心 5 min， 取上清液于 50 mL 离心管中；残渣中加乙腈 10 mL，重复提取一次，合并两次提 取液，于 45 ºC 氮气吹扫至近干；加去离子水 10 mL 于离心管中，超声 5 min 使充 分溶解，加 20 mL 正己烷，振荡 5 min，5000 r/min 0 ºC 低温离心 5 min，丢弃上层 正己烷层（包含两项间的脂肪膜），用氮气吹扫去除残余的正己烷，取下层溶液 待净化。所得样品提取液经 Agilent Bond Elut C18 固相萃取小柱净 化和富集后，使用配备了 Agilent Poroshell 120 EC-C18 色谱 柱的高效液相色谱系统对其中的甲砜霉素残留进行快速分 析，图 1 所示为固相萃取操作流程，表 1 所示为液相色谱分 析条件。

如图 2 所示，采用 Poroshell 120 EC-C18 快速色谱柱，单次运行 10 分钟内即可完成样品分析，比原国标方法节约近一半时间。 经乙腈萃取沉淀蛋白并经 Bond Elut C18 固相萃取净化后的样 品，其色谱图中甲砜霉素出峰位置没有基质干扰的存在，表 明此方法有效的去除了干扰杂质，如图 3 所示。50 µg/kg 添 加水平的牛奶样品连续进样六次考察重复性（见图 4），六次 进样峰面积响应 RSD 为 0.91%，表明仪器系统具有很好的稳 定性。如图 5 和表 2 所示，本文所述方法在 20 ~ 1000 ng/mL 线性范围内甲砜霉素的线性相关性良好；在 10-100 µg/L 的 添加水平下，甲砜霉素的平均回收率为 75.0% ~ 95.0%，RSD ≤ 10% (n = 3)。

本文所述方法参照 GB 29689-2013 国标方法，但也对国标方 法进行了一定程度的优化，采用乙腈作为提取溶剂，是因 为乙腈不但可以保证对甲砜霉素的提取，对蛋白的沉淀效 果优于国标方法中所使用的提取溶剂乙酸乙酯，提取脂肪 的能力却远远弱于乙酸乙酯。该方法不但大大提高了牛奶 中甲砜霉素的检测效率和检测通量，而且减少了分析过程 中的溶剂的消耗，同时大大减少了对环境的污染，在普通 液相色谱系统上即可实现牛奶中甲砜霉素残留量的快速高 效检测。