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牛肝中兽药多残留的LC/MS/MS分析

发布时间:2022-02-10   点击次数:214次

摘要:Agilent Bond Elut QuEChERS 增 强 型 脂 质 去 除 产 品 (Agilent Bond Elut QuEChERS EMR-Lipid) 是新一代样品前处理产品,适用于便捷的分散固相萃取 (dSPE)。这种材料对 于共萃取基质具有较高选择性,尤其适用于脂肪样品(脂肪含量 > 5%),而不会对分析 物回收率产生不利影响。本研究介绍应用这款新型产品对牛肝中的 30 种代表性兽药进 行的分析。分析流程包括利用酸化乙腈实现快速高效的蛋白质沉淀萃取,然后使用 EMR-Lipid 增强型脂质去除净化管和 EMR-Lipid Polish 反萃管进行进一步净化。研究中 通过共萃取物重量与柱后注射实验来测定由 EMR-Lipid 方案去除的基质量。与其他基质 净化产品相比,EMR-Lipid 增强型脂质去除净化管能够提供更有效的基质去除和更出色 的分析物回收率。EMR-Lipid 优化方法能够为各种浓度下的全部 30 种兽药提供洁净度以及优异的准确度和精密度,实现快速、稳定而有效的高脂肪含量样品分析。


前言 兽药广泛用于食品生产行业的动物中,以预防动物疾病或作为生 长促进剂。这些药物将在动物组织中发生富集,使用不当更是会 导致药物残留在食用组织中不断积累,对人类健康构成威胁。随 着人们对食品安全的日益关注,几乎每个国家都出台了限制食品 动物产品中所使用药物的法规 [1-4]。 肌肉、肝脏和鸡蛋等动物源食品通常具有复杂的化学成分,因此, 采用包括常规萃取和高效净化的高效样品前处理方法至关重要。 已有的样品前处理方法包括传统的溶剂萃取、固相萃取 (SPE) 或 多项技术的组合。这些方法通常费力费时,仅适用于有限的化合 物类别,并且需要额外进行方法开发。 多类别、多残留方法在监管性监测项目中越来越受青睐,因为它 们可以扩大分析范围并提高实验室效率。过去几年来接受监测的 兽药数量越来越多,如今已报道了 100 多种兽药 [5-8]。样品前处 理通常包括采用乙腈:水混合物进行萃取,然后利用 C18 和/或其 他净化技术进行净化。C18 等吸附剂去除共萃脂质的能力有限,可 能在稀释或复溶过程中产生沉淀。沉淀生成后需要在 LC/MS/MS进样之前对样品进行过滤,这可能造成分析物损失。可以在分散 固相萃取 (dSPE) 过程中加入己烷来去除共萃取液中的脂质,但这 种方法费时费力且无选择性,并且会去除疏水性分析物。与 C18 相比,使用氧化锆吸附剂进行净化能够改善基质净化效果,但也 会导致更多的分析物损失,对于氟喹诺酮、四环素和大环内酯等 含羧酸和羟基的化合物而言尤其如此 [7,8]。


Agilent Bond Elut QuEChERS EMR-Lipid 增强型脂质去除产品是 一种新型吸附剂材料,能够选择性去除样品中的主要脂类而不会 使分析物损失。去除复杂基质中的脂质干扰物对于 QuEChERS 和 蛋白质沉淀等技术而言尤其重要。由于这些简单的样品前处理方 法无法充分去除脂质,因此脂质共萃取物将与目标分析物一起保 留到最终样品萃取物中。这会导致色谱峰异常、数据精密度和准 确度下降以及维护问题增加。在本研究中,我们考察了一种用于 分析牛肝中 30 种棘手的代表性兽药的新型样品前处理方法,该方 法采用简单的蛋白质沉淀萃取后用 EMR-Lipid 进行净化。所选的 兽药代表了 17 种不同的类别,包括亲水性、疏水性、酸性、中性 和碱性药物。表 1 显示这些兽药的化学和法规信息。


实验部分: 所 有 试 剂 和 溶 剂 均 为 HPLC 或 分 析 纯 级 。 乙 腈 (ACN) 购 自 Honeywell(美国密歇根州马斯基根)。二甲基亚砜 (DMSO)、兽 药标准品和内标购自西格玛奥德里奇公司(美国密苏里州圣路易 斯)。试剂级甲酸 (FA) 购自安捷伦公司(部件号 G2453-86060)。 乙酸铵 (NH4OAc) 购自 Fisher Chemicals(美国新泽西州费尔 劳恩)。


溶液与标准品 将 5 mL 甲酸加入 95 mL ACN 中新鲜制得甲酸 (5%) ACN 溶液。 将 19.27 g NH4OAc 溶解于 250 mL Milli-Q 水中制得乙酸铵储备 液 (1 M)。该溶液保存于 4 °C。将 5 mL 1 M 乙酸铵储备液加入 1 L Milli-Q 水中,制得 5 mM 乙酸铵水溶液。 标准品和内标 (IS) 储备液采用 DMSO 进行配制,除达氟沙星与环 丙沙星的 DMSO 储备液浓度分别为 1.0 mg/mL 和 0.25 mg/mL 外,其他储备液浓度均为 2.0 mg/mL。阿莫西林和头孢唑啉储备液采用水进行配制,浓度为 2.0 mg/mL。除阿莫西林和头孢唑啉 储备液用塑料瓶配制以外,其他所有储备液均在棕色玻璃瓶中进 行配制。所有储备液均保存于 -20 °C 下。根据仪器响应不同,将 30 种化合物分为两组 G1 和 G2。在 1/1 的 ACN/水中配制得到 25/5 µg/mL 的混合 (G1/G2) 标准工作溶液。氟尼辛-d3 内标工作 溶液 (25 µg/mL) 也采用 1/1 的 ACN/水进行配制。


设备 样品前处理所用的设备和材料包括: • Geno/Grinder(SPEX,美国新泽西州墨图根) • Centra CL3R 离心机(Thermo IEC,美国马萨诸塞州) • Eppendorf 微型离心机(Brinkmann Instruments,美国纽 约州韦斯特伯里) • 涡旋仪和多管涡旋仪(VWR,美国宾夕法尼亚州拉德诺) • 瓶口分液器(VWR, 美国新泽西州南普兰菲尔德) • Eppendorf 移液管和重复用吸管• Agilent Bond Elut EMR-Lipid 增强型脂质去除净化管 (部件号 5982-1010) Agilent Bond Elut EMR-Lipid Polish 反萃管 (部件号 5982-0101)


仪器 实验采用 Agilent 1290 Infinity LC 进行分析,其中包括: • Agilent 1290 Infinity 四元泵 (G4204A) • 配备 Agilent 1290 Infinity 自动进样器温控器 (G1330B) 的 Agilent 1290 Infinity 高性能自动进样器 (G4226A),以及 Agilent 1290 Infinity 柱温箱 (G1316C) 该 UHPLC 系统联用配备安捷伦喷射流电喷雾离子源并采用 iFunnel 技术的 Agilent 6490 三重四极杆液质联用系统。采用 Agilent MassHunter 工作站软件进行数据采集和分析。

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