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唾液中的药物和代谢物 免疫筛查与 LC/MS/MS 确认和定量

发布时间:2022-04-10   点击次数:285次

前言:唾液因为其容易获取,难以掺伪,技术改进可以进行更广泛的药物筛查而越来越广泛地被作为药物测试基质使用。唾液分析用于工作场所药物检测、刑事司法、路边样品采集、事故后处理、“追因"检查和疼痛管理计划等方面。唾液中药物定量的主要问题之一是较难收集足够体积的样本量以便对更多的化合物进行可靠的确认。很多装置都不能给出唾液收集的体积,因此,如果没有实验室进一步的处理,任何定量结果都毫无意义。此外,配备收集垫或材料用于唾液收集的装置在分析之前不能给出每种药物能从垫上回收的量,这也使定量成为一难题。本文提到的分析方法使用 Quantisal™ 唾液收集器(Immunalysis 公司,如下所示),可以采集已知体积的纯唾液量。对很多药物从收集衬垫回收至转运缓冲液中的回收率进行了评估,结果列于下图。


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用于 LC/MS/MS 确认和定量的样品前处理鉴定过程包括向唾液样品中添加氘代内标、用缓冲液处理、固相萃取 (SPE),以及使用液相色谱-串联质谱 (LC/MS/MS) 进行分析。碱性药物(这里适用于除肌安宁和眠尔通以外的所有药物)SPE 色谱柱:Plexa PCX(部件号 12108601,60 mg/1 mL 或部件号 12108603,60 mg/3 mL)

1.量取一份 (1 mL) 唾液样品:Quantisal 缓冲液混合物(相当于 0.25 mL 纯唾液)

2. 向样品中加入适量内标和 0.1 M 磷酸钾缓冲液(pH 6.0;1 mL)

3. 活化:甲醇 (0.5 mL)

4. 上样;不要使柱子*干燥

5. 淋洗:2% 甲酸 (1 mL);甲醇 (1 mL)

6. 通氮气吹干柱子 (5 min)

7. 洗脱:乙酸乙酯:氢氧化铵(98:2,v/v;2 mL)

8. 蒸发至干;用流动相重新溶解 (50 µL)酸性药物SPE 色谱柱:Plexa(部件号 12109301,30 mg/1 mL 或部件号 12109303,30 mg/3 mL)1. 量取一份 (1 mL) 唾液样品:Quantisal 缓冲液混合物(相当于 0.25 mL 纯唾液)2. 向样品中加入适量内标和醋酸(pH 4.0;1 mL)3. 活化:甲醇 (0.5 mL);0.1 M 醋酸 (0.1 mL)4. 上样;不要使柱子*干燥5. 淋洗:去离子水:醋酸(80:20,v/v;1 mL);去离子水:甲醇(40:60,v/v;1 mL)7. 通氮气吹干柱子 (5 min)8. 洗脱:己烷:醋酸(98:2,v/v;1 mL)9. 蒸发至干;用流动相重新溶解 (50 µL)肌安宁和眠尔通SPE 色谱柱:Plexa(部件号 12109301,30 mg/1 mL 或部件号 12109303,30 mg/3 mL)1. 量取一份 (1 mL) 唾液样品:Quantisal 缓冲液混合物(相当于 0.25 mL 纯唾液)2. 向样品中加入适量内标和 0.1 M 磷酸钾缓冲液(pH 6.0;1 mL)3. 活化:甲醇 (2 mL),0.1 M 磷酸钾缓冲液(pH 6.0;2 mL)4. 上样;不要使柱子*干燥5. 淋洗:去离子水 (2 mL);甲醇:去离子水 25:75 v/v (1 mL)6. 通氮气吹干柱子(30 psi,5 min)7. 淋洗:己烷 (1 mL)8. 真空下干燥柱子 (5 min)9. 洗脱:乙酸乙酯:己烷 50:50 v/v (3 mL)10. 蒸发至干;用流动相重新溶解 (50 µL)


LC/MS/MS 仪器本文介绍的检测均在下列仪器上进行:Agilent 1200 系列 UHPLC,包括:G1379B 微量真空脱气机G1312B SL (600 bar) 二元泵,配备溶剂选择阀;标准延迟体积配置G1367D 多孔板进样器,在针座和进样阀间配有 0.2 µm 在线过滤器(部件号 5067-1553)G1316B 恒温柱箱,带 6 通柱切换阀Agilent 6430A 三重四极杆 LC/MS/MS 系统,配置安捷伦正交 ESI 电离源。除非另有说明用于特定的化合物,否则离子化模式采用阳离子模式。

 

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