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使用1290 Infinity液相色谱仪系统分析中药注射液

发布时间:2022-05-15   点击次数:1933次

摘要:本文使用安捷伦 1290 Infinity 二维液相系统 (2D-LC) 开发了一个用于分析复杂中药成分的全二维液相方法,在较短的分析时间内大幅提高了方法的峰容量,为复杂样品体系的分析提供了新的解决方案和思路。此方法使用安捷伦 1290 Infinity 2D-LC 系统及相应软件功能进行开发和编辑,方法使用简便,结合安捷伦 Zorbax 及 Poroshell 系列色谱柱,分析快速,结果重现,能够大幅提高中药等复杂样品的分离效率,可以进行更加快速准确的定性鉴别分析。


前言中药化学成分分析是中药药效物质阐明及质量控制的关键问题之一,液相色谱分析(HPLC) 是进行此类定性定量工作的主要手段。由于中药化学成分的复杂性,中药成分分析一直存在着分离难度大、分析时间长等问题,近十年来发展起来的超高效液相色谱(UHPLC) 以及相应的液质联用技术极大提升了对此类复杂样品的分离能力及速度。但是随着此类研究的不断深入,对于中药复方体系的综合研究,相关的代谢疗效研究等都对仪器分析方法的分离效率提出了更高的要求,即使是 UHPLC 方法也难以在较短时间内提供分离此类复杂样品的足够峰容量。


目前,在使用一根色谱柱的前提下增加峰容量的主要两个手段有两种:增加色谱柱长度、降低色谱柱填料粒径,这两种手段对峰容量的提升比较有限,而且都会显著增加方法运行时产生的压力,通过增加柱长的方法还会增加分析时间,对整体分析的效率提升不大。随着仪器技术的发展,全二维液相色谱 (Comprehensive2D-LC) 技术成为了在短时间内获得*峰容量的手段,为这类复杂样品的分析提供了更高效的解决方案。本文使用了安捷伦全新的 1290 Infinity 二维液相 (2D-LC) 系统成功的对一个中药样品进行了全二维液相色谱分析,该中药是一个由三味药材组成的复方,经水解提取后制成中药注射液,成分组成复杂,即使使用较长的 UHPLC 色谱柱进行长时间分析也难以将样品中的组分进行良好分离,在本文开发的全二维方法中,利用了不同固定相及流动相选择性的差异,在短时间内极大提高了分析方法的峰容量,获得了更多的样品信息,此方法分析迅速,重现性良好,为复杂中药样品的分析提供了新的思路和解决方案。


实验仪器及试剂:仪器:安捷伦 1290 2DLC 系统,具体配置如下安捷伦 1260 Infinity 二元泵(第一维)安捷伦 1290 Infinity 二元泵(第二维)安捷伦 1290 Infinity 自动进样器安捷伦 1290 Infinity 柱温箱安捷伦 1290 Infinity 二极管阵列检测器(两台)安捷伦 1290 Infinity Flex Cube 多功能模块安捷伦 1200 Infinity 双 2 位/4 通阀安捷伦 6224 飞行时间质谱安捷伦 ChemStation 软件(配置 2DLC 功能插件)安捷伦 MassHunter 软件LC×LC 二维色谱数据处理软件(HRMS 版,GCimage Inc.)试剂:实验用超纯水由 Milli-Q(Millipore Inc.)纯水机制备;甲醇,乙腈均为 HPLC 级,采购于迪马公司;乙酸铵,乙酸,甲酸均为 HPLC级,采购于百灵威公司。

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实验结果图 2 是使用上述方法对样品进行 2D-LC 分析并使用 LC×LC(HRMS 版本 GCimage)软件得到的等高散点数据图(由 DAD 检测器 254 nm 数据处理得到),图中每个数据点代表一个二维分析得到的色谱峰,该点的横纵坐标分别代表其在第一维和第二维分析上的保留时间,第一维为标准分析方法,横坐标时间单位为分钟 (min),第二维为超快速梯度分析,纵坐标时间单位为秒 (s)。从图中可以看出数据点随机分散于图中较大的扇形区域内,证明两维梯度条件均能让样品在各自维度上得到尽可能好的分离,具有较好的正交性。对相同样品进行了 5 次重复分析以考察方法的重现性,以样品中强度较高的 9 个峰(图 3)为考察指标分别对第一维和第二维保留时间(基于 DAD 数据结果)进行了计算,结果良好(表 3),证明此方法可以用于鉴别不同批次或工艺产品间组份组成的差异。

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