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气质联用仪测定生物样品中的浴盐

发布时间:2022-07-28   点击次数:250次

前言2-(吡咯烷-1-基)苯基-1-酮 (PVP)和(Naphyrone) 是作为浴盐销售的策划药物。这些药物是吡咯tong的类似物。它们由于被当作诸如 MDMA 等药物的合法替代品而被滥用。这些化合物的使用已被注意到能够导致心动过速、高血压、刺激、极度恐慌发作和兴奋性精神错乱。本应用简报描述了对全血血清、玻璃体液、尿液或组织匀浆标本的分析方法。分析中需要样品的最少量为 3 mL。使用液液萃取法将 2-(吡咯烷-1-基)苯基-1-酮 (PVP)、吡咯tong和 Naphyrone以及内标罗哌la因从碱化样品萃取到有机溶剂中。使用乙酸乙酯复溶萃取物,然后进样到四极杆离子阱气相色谱-串联质谱中进行分析。


实验部分标准品和试剂试剂• 1-氯丁烷 (Nanograde)、乙酸乙酯、浓氨水 (NH4OH)、碳酸钠/碳酸氢钠缓冲液 pH = 9.8(将 100 g 碳酸钠与 50 g 碳酸氢钠混合于 1000 mL 去离子水中,调节 pH 至 9.8)。在室温下的稳定期为 1 年。• 浓盐酸、甲醇(HPLC 级)、0.1% 盐酸的甲醇溶液(将 0.1 mL浓盐酸稀释于 100 mL 甲醇中。在室温下的稳定期为 1 年)。• Naphyrone 和吡咯tong储备标准品(1 mg/mL 的甲醇溶液)购自 Cerilliant(储存于冰箱中直至过期)。• PVP 储备标准品购自 Cayman Chemical(10 mg 瓶装),将所容物转移至 10 mL 烧瓶中,用甲醇定容。在冰箱中的稳定期为 2 年。• 罗哌ka因储备标准品购自 Sigma (R0283),使用甲醇将 11.9 mg标准品稀释至 10 mL。在冰箱中的稳定期为 2 年。•  储备标准品购自 Cayman Chemical,50 µL 乙酸甲酯中含 5 mg 标准品(在甲醇中稀释至 5 mL)。储存于冰箱中可稳定 1 年。• Naphyrone QC 储备标准品(1 mg/mL 的甲醇溶液)购自Cerilliant。储存于冰箱中直至过期。• 吡咯tong QC 储备标准品购自 Cayman Chemical(100 µL 甲醇中含 5 mg 标准品),将所容物转移至 5 mL 烧瓶中,用甲醇定容。在冰箱中的稳定期为 2 年。• PVP QC 储备标准品购自 Cayman Chemical,10 mg 瓶装(将所容物转移至 10 mL 烧瓶中,用甲醇定容。在冰箱中的稳定期为 2 年)。


工作标准品、Naphyrone、PVP 校准中间标准品 15 µg/mL(将 150 µL 各储备标准品加入 10 mL 烧瓶中,分别用甲醇定容至 10 mL)。• Naphyrone、PVP QC 中间标准品 15 µg/mL(将 150 µL 各储备标准品加入 10 mL 烧瓶中,分别用甲醇定容至 10 mL)。• 工作内标物罗哌ka因 15 µg/mL(将 150 µL 储备液加入 10 mL烧瓶中,分别用甲醇定容至 10 mL)。在 2-8 ºC 下储存。稳定期为 1 年。


对照和校准标准品阴性对照 — 来自美国红十字会的不含药物的全血或收集的空白尿液。基质必须在使用前进行检验并判定不含药物。当储存于 -20 ºC时,稳定期为 1 年。低对照 (125 ng/mL) — 根据需要在血液或尿液中现配,将 25 µLQC 中间标准品加至 3 mL 空白血液或尿液中可得。高对照 (500 ng/mL) — 根据需要在血液或尿液中现配,将 100 µLQC 中间标准品加至 3 mL 空白血液或尿液中可得。


样品制备使用如下工作标准品和不含药物的血液或尿液制作校准曲线:用移液管将 3 mL 样品、阴性和阳性对照移取到带标记的 16 ×100 mm 培养管内,加入 50 µL 工作内标物和 2 mL pH 9.8 的碳酸盐缓冲液,向各管内加入两滴 NH4OH,轻轻涡旋至均匀。向各管内加入 7.0 mL 1-氯丁烷,加盖,然后旋转所有管至少 10 min。在3,000 RPM 下将所有管离心 10 min。将有机层(顶层)移至干净的带标记 16 × 100 mm 培养管内。加入两滴 0.1% 的盐酸甲醇溶液,在 37 ºC 下用氮气蒸发至干燥。将用 200 µL 乙酸乙酯复溶干燥的萃取物转移至具有内插管的自动进样器样品瓶,加盖,然后转到气相色谱-串联质谱中进行分析。

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结果与讨论下列标准用于确定吡咯tong类似物是否存在以及其含量。• 色谱分析结果可被接受(峰分辨率、峰对称性、不存在交叉污染)。存在可用来定量和定性的选择性离子。来自测试标本的假定吡咯tong类似物的保留时间大约在最近一次校准保留时间的 ± 2% 以内。• 使用类似物和内标物定量离子的面积进行定量分析。通过比较未知物和对照物的相对响应,并比较各校准物浓度的相对响应而产生的校准曲线来实现定量。阳性对照必须处于其靶标范围内,阴性对照中不能有吡咯tong类似物存在。• 必须观察到适当的 m/z 离子。测试标本和阳性对照必须在PVP、Naphyrone 和罗哌ka因内标各自的保留时间处表现出由 126 m/z 的电离所产生的 m/z 离子。• 使用双离子比例法进行鉴定。对于PVP和 Naphyrone,将 m/z 离子峰 124 和 97 的丰度除以基础离子峰 84 的丰度。计算得出的离子比例处于校准确定的靶标值的 20% 以内。


结论本应用简报展示了一种使用罗哌ka因作为内标物来测定生物样品中吡咯tong类似物的灵敏且稳定的选择性方法。对于吡咯tong类似物的分析,气相色谱四极杆离子阱串联质谱的优势不可低估。气相色谱四极杆离子阱串联质谱在减少样品基质干扰、改善信噪比及其兼具高选择性和灵敏性方面,为吡咯tong类似物的分析提供了可信度更高的解决方案。气相色谱四极杆离子阱串联质谱分析具有减少假阳性和假阴性的潜力,还能在所得的结果中实现更高的可信度。使用上文所列的优化方法,可将快速、靶向的气相色谱-串联质谱方法用于解决当前法医实验室所面临的吡咯tong类似物分析难题。联合使用阳性对照与阴性对照可确保在未知生物样品中进行精确定量并排除假阴性。在多种样品基质中均观察到了针对吡咯tong类似物低至 ng/mL 的检测限。

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