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液质联用系统检测大鼠血液中的氯氮ping及其代谢物

发布时间:2022-08-17   点击次数:225次

实验部分样品制备向大鼠全血中加入不同浓度的氯氮ping、去甲氯氮ping和 N-氧化氯氮ping (0.5 - 10000 ng/mL)作为氯氮ping及其代谢物的校正标准。然后将校正标准 (20 µL) 点到宝莱 DBS 2B 型卡片上,各重复 3 次,干燥过夜待分析。以点有大鼠全血的 DBS 卡片作为空白样品。以氘代氯氮ping(D4) 作为氯氮ping及其代谢物定量的内标。系统配置AACE LC/MS 系统(图 2)包括:可进行 DBS 卡片自动化分析的 AACE 仪器10;两台 Agilent 1260 Infinity 二元液相色谱泵(一台用于在线样品提取和净化,另一台用于分析型液相色谱分离);用于样品稀释的 Agilent 1260 Infinity 等度液相色谱泵;用于分析物检测的 Agilent 6460 三重四级杆液质联用LC/MS 系统。系统中所有组件和 DBS 卡片提取、样品捕集、洗脱和 LC/MS 分析的整个过程均由单一软件程序进行控制(图 3)。

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质谱仪设置质谱分析使用以正离子化模式运行的配置安捷伦喷射流离子源的 6460 三重四级杆LC/MS 系统进行。离子源条件和多反应监测 (MRM) 方法参数已针对氯氮ping及其代谢物进行了优化(表 3)。DBS 方法时间段设置时间段 1 从 DBS 中提取样品至捕集柱 1 90 s时间段 2 捕集柱 1 样品冲洗 70 s时间段 3 将样品从捕集柱 1 转移至捕集柱 2 30 s时间段 4 运行分析及捕集柱 1 冲洗和平衡 240 s


DBS 分析方法包括一个样品加载的初始准备阶段,和具有不同阀位置及泵程序的四个优化时间段(时间段 1 - 时间段 4),以便进行在线样品提取、捕集和净化,以及LC/MS 分析。如图 4 所示,时间段 1 中将启动提取泵程序和稀释泵程序,而时间段 4 中将启动分析泵程序和 6460 三重四级杆 LC/MS 系统。在分析型 LC 梯度仍在运行时即可再启动下一次 DBS 提取的提取泵程序。因此,提取步骤与分析运行在时间上是相互重叠的,使分析周期(连续两次 DBS 提取之间的持续时间)能够缩短至 10 分钟以内。

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……

结论我们已经证实使用自动化在线卡片提取系统,可利用 LC/MS 直接对 DBS 卡片上大鼠全血中的氯氮ping及其两种代谢物进行分析。该系统可提供灵敏度,其LOQ 为 0.5 ng/mL,并可在超过 4 个数量级的动态范围内提供优异的线性(平均 R2> 0.999)。定量分析的准确度 (85 –109%)、重现性 (%RSD < 6.2%) 和精确度 (%RSD< 8.9%) 良好,且均符合生物分析可接受标准。此外,自动化在线卡片提取系统与离线提取打孔方法相比,定量性能相差无几。

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