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对三七总皂苷进行快速液相色谱分析

发布时间:2022-09-06   点击次数:171次

前言:三七(Panax notoginseng,也称 San Qi)是一种五加科植物 。它能够影响血液循环 ,是一种治疗出血性疾病的传统中草药 [1],也可以用作补品 。三七中的皂苷大约占其总重量的 8–12%。其主要生物活性成分三七总皂苷常用来治疗冠心病 、心绞痛 、中风和动脉硬化[2,3]。三七总皂苷包含一些活性组分 ,如三七皂苷 R1、人参皂苷 Rg1、Rb1、Re 和 Rd。皂苷的分析对于评价三七及其中药制剂的质量非常重要 。当采用常规液相色谱柱 ,按照《中国药典 》方法分析三七总皂苷时[4],HPLC 运行时间通常超过 60 分钟 。安捷伦 Poroshell 120 EC-C18(2.7 µm)色谱柱填充了表面多孔填料 ,具有与亚 2 µm 全多孔填料色谱柱相似的性能 ,可以实现快速分离 ,并且柱压低 。本应用报告介绍了一种采用 Poroshell 120 EC-C18 色谱柱 ,在 Agilent 1290 Infinity 液相色谱系统上分析三七皂苷 R1、人参皂苷 Rg1、Re、Rb1 和 Rd 的快速质量控制方法 。与常规方法相比 ,该方法快速 、高效 、分离度高 ,溶剂消耗也大大减少 。


实验部分分析采用 Agilent 1290 Infinity 液相色谱系统 ,包括一套二元泵(G4220A)、一个柱温箱(TCC,G1316C)、一台自动进样器(G4226A)和一台二极管阵列检测器(DAD,G4212A)。色谱柱Agilent ZORBAX Eclipse Plus C18,4.6 × 250 mm,5 µm(部件号 959990-902)Agilent Poroshell 120 EC-C18,4.6 × 75 mm,2.7 µm(部件号697975-902)


化合物目标化合物及其结构见图 1。用 70% 的甲醇水溶液配制浓度为2.5 mg/mL 的样品溶液 。三七总皂苷购于当地一家中药店 。称取25 mg 样品粉末置于 10 mL 容量瓶中 ,加 70% 的甲醇水溶液将其溶解并定容至刻度 。用 0.45 µm 再生纤维素膜过滤器(部件号5064-8221)对上述溶液进行过滤 ,然后取滤液直接进样到 HPLC系统 。


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结果与讨论采用安捷伦 ZORBAX Eclipse Plus C18(4.6 × 250 mm,5 µm)色谱柱 ,按照 2010 年版《中国药典 》中的方法测定三七总皂苷 。分离三七皂苷 R1、人参皂苷 Rg1、Re、Rb1 和 Rd 用时约60 分钟 。目标化合物实现基线分离且峰形 良 好 。安捷伦Poroshell 2.7 µm 颗粒色谱柱具有与亚 2 µm 全多孔颗粒色谱柱相似的柱效 ,但柱压更低 。采用安捷伦 Poroshell 120 EC-C18(4.6 × 75 mm,2.7 µm)色谱柱 ,可以快速实现方法的转移和优化 。如图 2 所示 ,分析时间从 60 分钟降至 18 分钟 ,同时难分离组分对 Rg1 和 Re 的分离度得到改善 ,并且 Rg1 的理论塔板数更高 ,超过了 2010 年版《中国药典 》的要求(N>6000)。采用安捷伦 Poroshell 120 EC-C18(4.6 × 75 mm,2.7 µm)色谱柱时 ,柱压低于 270 bar,非常适合在 400 bar 的 HPLC 上运行 。另外 ,溶剂的消耗也大大减少 ,降低了分析费用 。

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结论采用安捷伦 ZORBAX Eclipse Plus C18(4.6 × 250 mm,5 µm)色谱柱 ,按照传统方法分析了三七总皂苷 。采用更短的安捷伦Poroshell 120 EC-C18 色谱柱可以大大缩短分析时间 ,并获得更好的分离和峰形 ,从而节省大量时间和分析费用 。安捷伦Poroshell 120 色谱柱的柱效超过了 2010 年版《中国药典 》中分析三七总皂苷的相关要求 。本方法适用于评价三七及其中药制剂的质量 。

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