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及三重串联四极杆液质联用仪用于猪肉中 b2 受体激动剂的检测

发布时间:2022-09-20   点击次数:99次

 前言b2 受体激动剂是一种在肉类生产中违法使用的生长促进剂,能提高瘦肉率。它们是一种代谢调节剂,能将通常用于产生脂肪的能量转换成产生瘦肉的能量。最近,由于猪肉中高浓度 b2 受体激动剂(瘦肉精)导致的中毒事件时有发生。本应用使用安捷伦 Bond ElutPlexa PCX SPE 柱从猪肉中提取和富集 11 种 b2 受体激动剂,然后用 LC-MS/MS 进行定量分析。表 1 是 11 种 b2 受体激动剂的化合物名和结构。

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实验试剂和化学品所有试剂都是质谱、液相色谱或分析纯级别。乙腈和水购自 Honeywell。标准品购自中国药品生物制品检定所(NICPBP)。猪肉购自当地超市。标准溶液 (1.0 mg/mL) 用甲醇分别配制,并储存在–20 °C。混合工作溶液 (10 µg/mL) 用乙腈/水(10:90)配制并储存在 4 °C 的条件下。加标溶液每周用混合工作溶液加适量水新鲜配制。仪器和材料安捷伦 1200 高效液相色谱仪安捷伦 6460 三重串联四极杆液质联用仪安捷伦 Bond Elut Plexa PCX 萃取柱,60 mg,3 mL (p/n 12108603)安捷伦 Poroshell 120 EC-C18 窄径柱,2.1 × 100 mm,2.7 µm (p/n695775-902)安捷伦 Vac Elut 20 Manifold (p/n 12234101)


样品制备液-液萃取称取 5 克猪肉样品(±0.01 g),放入 50 mL 带盖的聚丙烯管中。加入 20 mL 的 0.2 M 醋酸钠 (pH 5.2) 溶液,涡旋混匀。然后加入250 µL b-葡萄糖醛酸酶(1000 U/mL),涡旋振荡 2 分钟彻底混匀样品,然后置于 37 °C 下反应 16 小时。酶解物振荡 15 分钟,然后在 4000 rpm 下离心 10 分钟,将 4 mL 上清液转移至另一个离心管中。加入 0.1 M 的高氯酸溶液调节 pH 至1 ± 0.3。在 4000 rpm 下离心 10 分钟,将上清液转移至另一只离心管中。用10M 氢氧化钠溶液将 pH 调至 11。加入 10 mL 饱和氯化钠溶液和 10 mL 异丙醇-乙酸乙酯 (60:40) 并振荡 5 分钟。在 4000 rpm 下离心 5 分钟,将有机层小心地转移至另一个离心管中。再次加入异丙醇-乙酸乙酯萃取,振荡,离心并收集上清液,重复两次,然后将所有的上清液合并。在 40 °C 下用氮气吹干。残留物用 5 mL 0.2 M 醋酸钠 (pH 5.2) 复溶。所得样品用于稍后的 SPE 纯化。


固相萃取固相萃取的步骤见图 1。安捷伦 Bond Elut Plexa PCX 萃取柱用3 mL 甲醇和 3 mL 水活化。将 5 mL 样品溶液移到萃取柱上,通过重力作用(约 1 mL/min)通过萃取柱。然后用 2 mL 水和 2 mL 2%的甲酸溶液淋洗萃取柱。在最高真空度下维持 3 分钟,使萃取柱彻底干燥。用 5 mL 5%的氨水甲醇溶液洗脱(流速 1 mL/min)。洗脱液用 40 °C 氮气吹干。用 1 mL 含 0.1% 甲酸的 水/乙腈 (90:10) 溶液复溶。样品通过涡旋振荡和超声使残留物彻底溶解,然后用0.45 µm 膜过滤。样品转移至 1.5 mL 样品管,并在 3000 转下离心5 分钟。上清液转移至 2mL 色谱样品瓶,用于分析。

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结论本研究表明,安捷伦 Bond Elut Plexa PCX 可以被用于复杂基质样品,如猪肉中 b2 受体激动剂的高效纯化和富集。基质加标样品的b2 受体激动剂的回收率和重现性都满足法规的要求。样品的基质效应和杂质含量都非常低,没有影响各目标化合物的定量分析。定量限 (LOQ) 远低于法规的最大残留 (MRL)。[1,2]

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