紫外-可见分光光度计测量为样品的质量控制检查提供了一种快速可靠的方法。它们 还可用于计算比活性或估算纯化后的产率,并鉴定含有蛋白质和氨基酸的组分。 含有芳香侧链氨基酸的蛋白质,在接近 280 nm 处产生吸收。因此可以使用紫外-可 见分光光度计进行定量分析。当吸收系数已知时,可根据比尔-朗伯定律 (1) 确定含 有这些氨基酸的蛋白质的浓度。通常蛋白质的样品量有限,以少体积进行测量对 于样品的保存至关重要。通过波长扫描可提供潜在污染物的信息。 Cary 3500 多池紫外-可见分光光度计具有光学准直的集成式多池支架,与超微 量比色皿(图 1)配合使用,非常适用于可靠且可重现的定性及定量测量。 为证明重现性,用超微量比色皿 (70 µL) 重复测量 3.0 mg/mL BSA 溶液 20 次,其中参比位置为装有 PBS 缓冲液的相同超微 量比色皿。此外,使用 3.5 mL、10 mm 光程的标准石英比色 皿对同样的溶液进行另外 20 次重复测量,以装有 PBS 缓冲液 的相同比色皿作为参比。这些测量均在 278 nm 处进行,信号 采集平均时间为 1 秒,光谱带宽为 2 nm。 |