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单克隆抗体的肽图分析:UHPLC 性能与表面 多孔颗粒相结合

发布时间:2018/12/17   点击次数:179
 
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反相色谱 (RP) 肽图分析是生物治疗药物分析中主要的技术,可为生物制药产品提供全
面的表征。当与质谱仪 (MS) 联用时,能实现对蛋白质及其变异体的鉴定,确定翻译后修
饰 (PTM) 及其位点,并确认蛋白质序列。然而,由于蛋白质裂解物固有的复杂性,使得
利用色谱进行肽图分析非常具有挑战性。因此,许多组织都致力于开发稳定、可靠的肽
图分析方法。通常而言,肽图分析受到灵敏度低、峰形差及需要较长分离时间来达到所
需分离度的影响。


近年来,人们应用安捷伦超液相色谱 (UHPLC) 以克服这些挑战,与常规 HPLC 相比,
UHPLC 经证实具有超高分离度、更高的灵敏度,且可大大缩短分析时间。UHPLC 技术
可更详尽地表征蛋白生物治疗药物,其通过加快流速、缩小粒径及缩短柱长,可在更短
的分析时间内实现更高的分离性能。但是,这种类型的分离对压力要求越来越高,不能
在常规的 400 和 600 bar 液相色谱仪上进行操作,严重地限制了其应用范围。


为了解除这种限制,安捷伦引入一种 2.7 µm AdvanceBio 肽图分析色谱柱以弥补生物治疗药物表征中的关键缺陷,可在常规液相色谱系统压力下,实现快速而的肽图分析。采用表面多孔色谱填料,AdvanceBio 肽图分析色谱柱可在很短的分析时间和低系统压力下大大改善肽图分析,同时保持很高的峰性能和分析效率。本研究采用 AdvanceBio 肽图分析色谱柱,在较短的分析时间内对一种单克隆抗体 (mAb) 胰蛋白酶消化物进行 LC/MS 肽图分析。此外还将 AdvanceBio 色谱柱及方法与一种亚 2 µm 非安捷伦 UHPLC 肽图分析色谱柱进行性能比较。

 
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