肽谱分析是表征生物治疗蛋白质*的工具，该方法广泛运用于生物药物 蛋白质的生产过程，以确保产品在各生产阶段的完整性和稳定性。利用安捷伦LC/MS 进行肽谱分析是表征肽段修饰的技术。稳定且重现性高的 LC/MS 方法， 是成功实现肽谱分析分离的关键。因此，需要对 LC/MS 分离参数进行全面的 研究。

分析复杂蛋白质酶解物的过程中，如何实现肽段的、高分离度分离是一项 巨大的挑战。甲酸是一种兼容质谱的离子对试剂，常用于 LC/MS 方法中，可实 现灵敏检测。然而，甲酸也会导致峰形展宽，从而使肽段发生共洗脱1 。除此之 外，流动相含甲酸的现有 LC/MS 方法具有峰容量小、峰展宽以及对相似肽段分 离度差的限制。选择正确的反相色谱柱和 LC/MS 方法，对肽谱分离的成功十分 重要。

Agilent AdvanceBio Peptide Plus 色谱柱专为的肽段分离而设计。HPH Poroshell 填料包覆了一层带正电荷的改性表面基团。采用 C18 配基的表面多孔 颗粒填料表面带电，可改善峰形并提高峰容量。孔径 (120 Å) 和粒径 (2.7 µm) 能够以低色谱柱反压提供类似 UHPLC 的性能。AdvanceBio Peptide Plus 色谱 柱还可以与含甲酸的流动相兼容，在与质谱联用时可提供出色的峰形。

本应用简报展示了 AdvanceBio Peptide Plus 色谱柱在用含甲酸的流动相对单克 隆抗体 (mAb) 进行肽谱分离时显示出的性能。本文通过研究流速、梯度时 间和温度等不同的填料影响因素，开发出了实现肽段分离的 LC/MS 方法。 并对峰容量、峰宽、峰面积、峰高、重现性和序列覆盖率等肽谱分析的关键要 素进行了评价。